技術(shu)簡介

CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是蛋白質-DNA互作(zuo)關系研究(jiu)的(de)新方法，是新一(yi)代超微量ChIP-Seq技術，適用于無ChIP級別(bie)抗體的(de)蛋白研究。與傳統的(de)ChIP-Seq研究方(fang)法(fa)相比，該技術無需交聯、超(chao)聲打斷(duan)、末端抹平和接頭連接等操(cao)作，因此(ci)具有(you)省時(shi)高(gao) 效、所需(xu)的樣品(pin)量少(shao)、背(bei)景信號低和(he)可重復(fu)性好等優點，甚至(zhi)可用于(yu)單細(xi)胞水平(ping)測序。CUT&Tag有望(wang)將(jiang)蛋(dan)白質-DNA互作的研究變成一種類似PCR反應的(de)常規操作(zuo)，對基因調控、表觀(guan)遺(yi)傳等領域的(de)研(yan)究具有(you)革命(ming)性的(de)意義。

產品(pin)優(you)勢

  樣品起始量低：能夠對及少量(liang)樣品進行分(fen)析(xi)

  無需ChIP級(ji)別抗體：無(wu)需提供ChIP級(ji)別抗體(ti)(ti)

  性價比高：背景噪(zao)音低，所(suo)需測序深度少

  實驗重(zhong)復性好：實驗(yan)重復(fu)結果一致性(xing)好

技術原理(li)

ChiTag是(shi)Protein AG蛋白與Tn5轉座酶的融合(he)蛋(dan)白，當抗體(ti)結合(he)目的蛋(dan)白（如轉錄因子、組蛋(dan)白等）后，Protein AG蛋(dan)白可直接結合抗(kang)體(ti)，攜帶的Tn5轉座酶(mei)可特異性(xing)的(de)切割(ge)目的(de)蛋白附近的(de)DNA pian段，并將DNA pian段連上接頭(tou)，文庫構建之后可進(jin)行高通量測序。

圖注： CUT&Tag實驗流程

案例解析

CUT&Tag技術研(yan)究蛋(dan)白質-DNA互作的(de)優(you)勢

原文：CUT&Tag for efficient epigenomic profiling of small samples and single cells

期刊：Nature Communications 發表時間：20190429 影(ying)響(xiang)因子： 11.878

在生物學(xue)研究中，DNA與(yu)蛋白質之(zhi)間的(de)互作是至(zhi)關(guan)重(zhong)要(yao)的(de)，參(can)與(yu)基因的(de)表(biao)達、調控、復制、重(zhong)組和(he)修復以(yi)及(ji)RNA的轉運(yun)、翻譯和調控等多(duo)個(ge)過(guo)程，幾(ji)乎涉及所(suo)有的生命活動(dong)。目前研究兩者互作的方法很多(duo)，作者選擇了傳統的研究手(shou)段ChIP-seq，優化的CUT&RUN方法(fa)，以及新方法(fa)CUT&Tag共同研(yan)究組蛋白H3K27me3。通過比對(dui)實驗結果，發現(xian)CUT&Tag有(you)*低的(de)背景噪聲以及(ji)zui強的信號(hao)。通過對H3K4me1修飾物(wu)進(jin)行(xing)分析，顯示CUT&Tag的(de)靈敏度(du)*高，實驗(yan)可重(zhong)復性*好。

圖注. CUT&Tag方法的優點

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