在(zai)收集(ji)標(biao)(biao)本前(qian)需有一個完整的計劃,需要清楚要檢(jian)測的成(cheng)份是否足夠穩(wen)定(ding)。ELISA檢(jian)測提(ti)倡新鮮標(biao)(biao)本盡早檢(jian)測,對收集(ji)后(hou)當天就進行(xing)檢(jian)測的標(biao)(biao)本,及時(shi)儲存在(zai)4℃備(bei)用(yong),如(ru)有特殊原因需要周(zhou)期收集(ji)標(biao)(biao)本,請取材后(hou),將標(biao)(biao)本及時(shi)分裝(zhuang)后(hou)放在(zai)-20℃或-70℃條件下保(bao)存。因冰室(shi)與(yu)室(shi)溫(wen)存在(zai)一定(ding)溫(wen)差,蛋(dan)白極(ji)易(yi)降解(jie),直接影響實驗質(zhi)量,所以避免反復凍融。
◇ 液體類標本:
包(bao)括血清、血漿、尿液、胸(xiong)腹水、腦脊液、細胞培養上(shang)清等。
◇ 血清:
室溫血液自然(ran)凝固10-20分(fen)鐘(zhong)后(hou),離心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左右(2000轉(zhuan)/分(fen))。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次(ci)離心(xin)。
◇ 血漿:
應(ying)根據(ju)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離(li)心20分鐘左右(2000轉/分)。仔細收(shou)集上清(qing)。保(bao)存(cun)過程中如有沉淀形成,應(ying)再次(ci)離(li)心。
◇ 尿液(ye):
用無菌管收集。離(li)心20分(fen)鐘左(zuo)右(2000轉/分(fen))。仔細收集上(shang)清。保存過程中如有(you)沉淀形成,應再次(ci)離(li)心。胸腹水(shui)、腦(nao)脊液參照(zhao)此實(shi)行(xing)。
◇ 細胞培(pei)養上清:
檢測分泌性的成(cheng)(cheng)份(fen)時(shi),用(yong)(yong)無菌管收(shou)集。離心20分鐘左(zuo)(zuo)(zuo)右(you)(2000轉(zhuan)(zhuan)/分)。仔細(xi)收(shou)集上清(qing)。檢測細(xi)胞(bao)(bao)內的成(cheng)(cheng)份(fen)時(shi),用(yong)(yong)PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xi)胞(bao)(bao)懸液,細(xi)胞(bao)(bao)濃(nong)度達(da)到100萬/ml左(zuo)(zuo)(zuo)右(you)。通過反復凍(dong)融,以使細(xi)胞(bao)(bao)破壞(huai)并放出細(xi)胞(bao)(bao)內成(cheng)(cheng)份(fen)。離心20分鐘左(zuo)(zuo)(zuo)右(you)(2000轉(zhuan)(zhuan)/分)。仔細(xi)收(shou)集上清(qing)。保存過程(cheng)中如有沉淀(dian)形(xing)成(cheng)(cheng),應再次(ci)離心。
◇ 組織標本:
切割標(biao)(biao)本(ben)(ben)后,稱取(qu)重量(liang)。加入一定量(liang)的(de)PBS,PH7.4。用(yong)(yong)液氮迅速冷凍(dong)保存備(bei)用(yong)(yong)。標(biao)(biao)本(ben)(ben)融化后仍然保持2-8℃的(de)溫度。加入一定量(liang)的(de)PBS(PH7.4),用(yong)(yong)手工或勻(yun)漿(jiang)器將標(biao)(biao)本(ben)(ben)勻(yun)漿(jiang)充分。離心(xin)20分鐘左右(2000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待(dai)檢測,其余冷凍(dong)備(bei)用(yong)(yong)。