ELISA樣本制備和收集指南

1.液體類型樣品

液體類實驗樣品含: 血(xue)清(qing)、血(xue)漿、尿液、胸腹水、細胞培養上清(qing)等。

【細胞培養上清】

將細胞培(pei)養基移(yi)至(zhi)離心管，并在(zai)4℃條(tiao)件(jian)下以1,500 rpm離心10分鐘。立即等分上清(qing)液并于-80℃下保存樣(yang)(yang)品(pin)。盡可(ke)能(neng)減少樣(yang)(yang)品(pin)凍融(rong)。

【血清】

室溫血(xue)液(ye)自然凝(ning)固10-20分鐘(zhong)后，在(zai)4℃條件下(xia)以3,000 rpm離心10分鐘(zhong)。立即等分上清(qing)液(ye)并于-80℃下(xia)保存樣(yang)品。保存過(guo)程中如有沉淀形成，應再(zai)次(ci)離心。避(bi)免反復凍融樣(yang)品。

【血漿】

將全(quan)血(xue)收集到含(han)抗(kang)凝血(xue)劑的管中，根據標(biao)本的要求選(xuan)擇(ze)EDTA、檸檬酸鈉或肝(gan)素作為抗(kang)凝劑，混(hun)合10-20分鐘后，在4℃條(tiao)件(jian)下以3,000 rpm離心10分鐘。立即(ji)等分上清(qing)液(血(xue)漿)并(bing)于(yu)-80℃下保存樣(yang)品。避免(mian)反復(fu)凍融樣(yang)品。

【尿液】

用無菌管(guan)收集(ji)，并(bing)在 4℃下(xia)以10,000 x g離心(xin)2分(fen)鐘。立即(ji)等分(fen)上清液并(bing)于-80℃下(xia)保(bao)存樣品(pin)。避免反復凍融樣品(pin)。

【唾液】

收集樣品并(bing)在(zai)4℃下(xia)以10,000 x g離心(xin)2分(fen)鐘(zhong)。等分(fen)上(shang)清(qing)液并(bing)在(zai)-80℃下(xia)保存樣品。避免反復凍(dong)融(rong)樣品。

2.組織樣品

采集組織(最(zui)好在(zai)(zai)冰(bing)上(shang)(shang)操(cao)作，并應盡可(ke)能快以(yi)(yi)(yi)防止被蛋白酶降(jiang)解)樣(yang)品(pin)(pin)后，稱取組織凈重，用液(ye)氮迅速冷凍(dong)保存備用。將樣(yang)品(pin)(pin)保存在(zai)(zai)- 80℃下以(yi)(yi)(yi)便后續使用或(huo)放置(zhi)在(zai)(zai)冰(bing)上(shang)(shang)進行直接勻漿。加入一定量的組織提取緩沖(chong)液(ye)，用手工或(huo)勻漿器將樣(yang)品(pin)(pin)勻漿充分(fen)。在(zai)(zai)4℃下以(yi)(yi)(yi)13,000 rpm離心20分(fen)鐘。置(zhi)于冰(bing)上(shang)(shang)，將上(shang)(shang)清液(ye)(可(ke)溶的蛋白質(zhi)提取物)等分(fen)至(zhi)新(xin)的冷卻管(guan)中并在(zai)(zai)-80℃下保存樣(yang)品(pin)(pin)。避免反(fan)復凍(dong)融樣(yang)品(pin)(pin)。

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