1.怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養條件？

ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數(shu)(shu)細胞的(de)(de)詳細資(zi)料。打開ATCC網頁的(de)(de)Cells and hybridomas鏈(lian)接，輸入細胞名稱就可(ke)以(yi)搜索ATCC的(de)(de)細胞數(shu)(shu)據(ju)庫。數(shu)(shu)據(ju)庫中有(you)每一種細胞的(de)(de)詳細描述，包(bao)括細胞的(de)(de)來源，培(pei)養和凍存條(tiao)件，以(yi)及相關文(wen)獻等(deng)資(zi)料。

2.如何選用特殊細胞系培養基？

培養(yang)(yang)某類型細(xi)胞(bao)沒有固定的培養(yang)(yang)條件。MEM中培養(yang)(yang)的細(xi)胞(bao)，很可(ke)能在DMEM或M199中同樣容易生(sheng)長。總之，MEM、DMEM做貼壁細(xi)胞(bao)培養(yang)(yang)；RPMI1640做懸浮細(xi)胞(bao)培養(yang)(yang)；

新的(de)細胞培養(yang)時要詳查資料。

3.自己新配制的液體培養基能保存多久？

我們建議(yi)將(jiang)新配制的培養基放(fang)置于4℃，避光保存盡量在一周(zhou)內使用完畢，培養基越新鮮越好。

4.培養基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？

一旦您在新(xin)鮮培養基(ji)中添(tian)加了血清和抗生素(su)時(shi)，您應(ying)該在一到兩(liang)周內使用它。因(yin)為一些(xie)抗生素(su)和血清中的基(ji)本成分在解凍后就(jiu)開始降解。

5.培養基中是否須添加抗生素？

除了特殊篩選(xuan)系統(tong)外，一般正(zheng)常(chang)培(pei)養狀態下，培(pei)養基中不應添加任何抗生素。

為(wei)防止細(xi)菌(jun)、真菌(jun)污染(ran)，可(ke)以(yi)加入青(qing)霉(mei)素(su)-鏈(lian)霉(mei)素(su)雙抗溶液，其培養(yang)基(ji)中的終濃度為(wei)青(qing)霉(mei)素(su)100U/ml，鏈(lian)霉(mei)素(su)為(wei)100ug/ml，但(dan)是不建(jian)議長期使用。

6.液體培養基可以放-20℃保存嗎？

不可(ke)(ke)以(yi)！因為在-20℃下，培養(yang)基中的鹽容(rong)易析(xi)出，培養(yang)基融化后，有(you)的鹽可(ke)(ke)能無法重新溶解，從而導致培養(yang)基滲(shen)透壓降低，培養(yang)細胞(bao)時(shi)，細胞(bao)容(rong)易破(po)裂而死亡。

7.為何培養基保存于4℃冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值越來越偏堿性？

培(pei)(pei)養(yang)基保存于(yu)4℃冰箱(xiang)中， 培(pei)(pei)養(yang)基內之CO2 會(hui)逐漸(jian)溢出，造(zao)成(cheng)培(pei)(pei)養(yang)基越來越偏(pian)堿性。而(er)培(pei)(pei)養(yang)基中的(de)酸堿指示劑(通常為phenol red) 的(de)顏色也會(hui)隨堿性增加而(er)更偏(pian)暗紅(hong)。培(pei)(pei)養(yang)基偏(pian)堿之結果， 將造(zao)成(cheng)細胞生長停滯或死亡(wang)。若培(pei)(pei)養(yang)基偏(pian)堿時， 可以(yi)通入無菌(jun)過濾(lv)的(de)CO2， 以(yi)調整pH 值(zhi)。

8.為什么液體培養基1640顏色發黃，是pH值不對嗎？

不是(shi)。因(yin)為配(pei)方原因(yin)，1640為減酚紅型，其中酚紅的(de)濃(nong)度(du)(du)只有DMEM的(de)四分之一(yi)，所(suo)以是(shi)因(yin)為酚紅濃(nong)度(du)(du)低，而(er)非(fei)PH值低。

9.培養液pH是怎樣影響細胞生長的？

由于(yu)大多數細(xi)胞(bao)(bao)(bao)適(shi)宜PH值(zhi)(zhi)(zhi)為(wei)7.2-7.4，偏離(li)此范圍對細(xi)胞(bao)(bao)(bao)將產(chan)生(sheng)有害的影響。各種細(xi)胞(bao)(bao)(bao)對PH值(zhi)(zhi)(zhi)要求也不q相同，原代(dai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)培養(yang)一般對PH值(zhi)(zhi)(zhi)變(bian)動耐受差(cha)，無限細(xi)胞(bao)(bao)(bao)系耐受力強。

但(dan)總體來說，細胞(bao)耐酸(suan)性(xing)比耐堿性(xing)強一些，偏(pian)(pian)酸(suan)環(huan)境中(zhong)更有利于細胞(bao)的生長。因此，配制培養(yang)用液時可把(ba)液體的PH值(zhi)稍微調的偏(pian)(pian)酸(suan)一些。液體在(zai)經(jing)過0.1um或0.2um濾膜(mo)過濾時，PH值(zhi)會(hui)向上浮動0.2左右。

10.培養液滲透壓是怎樣影響細胞生長的？

當細胞(bao)內(nei)、外環境的(de)分子濃度不同(tong)時就(jiu)會產生滲(shen)透壓。這(zhe)種情(qing)況(kuang)下，水(shui)分通過滲(shen)透流入或(huo)流出(chu)細胞(bao)，從而改變(bian)細胞(bao)的(de)內(nei)環境。

高滲(shen)(shen)透壓迫使水分從(cong)細胞(bao)(bao)中(zhong)擴散出(chu)來導(dao)致細胞(bao)(bao)收縮，這種(zhong)情況會使DNA和蛋白遭(zao)到破壞，細胞(bao)(bao)周期停滯以及(ji)最終使細胞(bao)(bao)死亡(wang)；反(fan)之(zhi)，低滲(shen)(shen)透壓使水分流入細胞(bao)(bao)內，使細胞(bao)(bao)腫脹(zhang)破裂。

11.為什么有客戶要求培養基中不含酚紅？

研究表明，酚(fen)紅(hong)可以(yi)模擬固(gu)醇類(lei)激素(su)的作用（特別是雌(ci)激素(su)）。為避免固(gu)醇類(lei)反應，細胞培(pei)養，尤其是哺(bu)乳類(lei)細胞時(shi)，用不(bu)加(jia)酚(fen)紅(hong)的培(pei)養基(ji)。由于酚(fen)紅(hong)干擾檢測(ce)(ce)，一些研究人(ren)員(yuan)在做流式細胞檢測(ce)(ce)時(shi)，不(bu)使(shi)用加(jia)酚(fen)紅(hong)的培(pei)養基(ji)。

12.酚紅的作用是什么？

酚(fen)紅在培養基中(zhong)被(bei)用來作為(wei)PH值指示劑(ji)：中(zhong)性(xing)時為(wei)紅色(se)(se)，酸性(xing)時為(wei)黃色(se)(se)，堿性(xing)時為(wei)紫色(se)(se)。

13.干粉培養基里含NaHCO3嗎？

所(suo)有的干粉(fen)培養基中(zhong)都(dou)不含NaHCO3 。

請依(yi)據說明書或包裝(zhuang)袋上的標注(zhu)，在(zai)干粉培養基溶解后添加(jia)NaHCO3 。

14.NaHCO3的作用是什么？

與(yu)CO2一起(qi)形(xing)成緩沖系統，保(bao)持培(pei)養基PH值穩定。

15.我們實驗室培養箱CO2濃度一直以來都是5%，這樣可以嗎？

當然不可(ke)以，不同的(de)(de)培養基(ji)要(yao)求添(tian)加(jia)NaHCO3的(de)(de)量不一(yi)樣，如DMEM要(yao)求添(tian)加(jia)3.7g/L，為了保持PH值(zhi)穩定，必須用高濃(nong)(nong)度(du)的(de)(de)CO2平衡(heng)，一(yi)般(ban)不低于8%，而1640等要(yao)求添(tian)加(jia)NaHCO3 2.2g/L，還有(you)些(xie)培養基(ji)要(yao)求添(tian)加(jia)更少(shao)，那么這些(xie)培養基(ji)就(jiu)要(yao)求較低的(de)(de)濃(nong)(nong)度(du)平衡(heng)，一(yi)般(ban)是(shi)5%。

16.培養基中丙酮酸鈉的作用是什么？

丙酮酸(suan)鈉可以作為(wei)細(xi)胞(bao)培養中(zhong)的替代(dai)碳源，盡管細(xi)胞(bao)更傾向于以葡萄(tao)糖(tang)作為(wei)碳源，但是如果沒有葡萄(tao)糖(tang)的話，細(xi)胞(bao)也可以代(dai)謝丙酮酸(suan)鈉。

丙(bing)酮(tong)酸鈉(na)的貯(zhu)存液濃(nong)度(du)一(yi)般為50mM，-20℃保存，培養基中的終濃(nong)度(du)為1mM.

17.谷氨酰胺的作用是什么？

幾乎所有的(de)(de)細胞(bao)(bao)對谷(gu)氨(an)(an)酰胺(an)(an)都有較高的(de)(de)要求(qiu)。谷(gu)氨(an)(an)酰胺(an)(an)脫掉氨(an)(an)基后，可(ke)作為(wei)培養(yang)細胞(bao)(bao)的(de)(de)能量來源(yuan)，參與蛋白(bai)質的(de)(de)合成和能量代謝。在(zai)缺(que)少(shao)谷(gu)氨(an)(an)酰胺(an)(an)時，細胞(bao)(bao)生長不良而死亡。所以，各種培養(yang)液中(zhong)都含有較大量的(de)(de)谷(gu)氨(an)(an)酰胺(an)(an)。

谷(gu)氨(an)酰胺在(zai)溶液中(zhong)很(hen)不穩定，應(ying)置-20℃冰凍保存，用前加(jia)入培(pei)養基中(zhong)。加(jia)有谷(gu)氨(an)酰胺的(de)液體培(pei)養基4度冰箱儲存兩周以上時，應(ying)重新加(jia)入原(yuan)來(lai)量的(de)谷(gu)氨(an)酰胺。

18.在培養基中加入HEPES有何好處？

培(pei)養基(ji)(ji)中的Buffer system是(shi)碳酸氫鹽，它(ta)可提供營養，但卻在生(sheng)理PH值條件(jian)下(xia)會降低緩(huan)沖能力(li)。而HEPES是(shi)一種(zhong)很強的Buffer，加入(ru)HEPES能使(shi)細(xi)胞(bao)培(pei)養基(ji)(ji)在PH7.2-7.6條件(jian)下(xia)緩(huan)沖能力(li)增強。

Hepes的貯存(cun)液濃度(du)一般為(wei)(wei)1M，常(chang)溫保(bao)存(cun)。培(pei)養(yang)基(ji)中的終(zhong)濃度(du)為(wei)(wei)25mM，即(ji)5ml 1M的Hepes加入(ru)到(dao)200ml培(pei)養(yang)基(ji)中。

19.GlutaMAX-Ⅰ是什么？培養細胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ？這個二肽有多穩定？

GlutaMAX-Ⅰ是(shi)一個L-谷氨(an)酰胺(an)(an)的(de)衍(yan)生物，其不穩定的(de)a-氨(an)基(ji)用(yong)L-丙氨(an)酸來保護。一種肽酶逐漸裂解(jie)二肽，釋(shi)放(fang)L-谷氨(an)酰胺(an)(an)供利用(yong)。

GlutaMAX-Ⅰ二肽(tai)非(fei)常(chang)穩定，即使在121℃滅菌20min， GlutaMAX-Ⅰ二肽(tai)溶液有最(zui)小的降(jiang)解；而在相同條(tiao)件下，L-谷氨(an)酰胺降(jiang)解。

L-谷氨(an)酰胺在細(xi)胞培養時是重要的(de)(de)，但其(qi)在溶液中不穩定，經(jing)過一(yi)段時間(jian)后會降解，確切(qie)的(de)(de)降解率一(yi)直沒有(you)最終確定。L-谷氨(an)酰胺的(de)(de)降解導致(zhi)氨(an)的(de)(de)形成，而氨(an)對(dui)于一(yi)些細(xi)胞具有(you)毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是細(xi)胞培養中谷氨(an)酰胺的(de)(de)替(ti)代品。

20.可否使用與原先培養條件不同的培養基？

不能。每(mei)一(yi)細胞株均有其特(te)定(ding)使(shi)用(yong)且(qie)已(yi)適應(ying)(ying)之(zhi)(zhi)細胞培養基(ji)，若(ruo)驟然使(shi)用(yong)和原先提供之(zhi)(zhi)培養條件(jian)不同(tong)的培養基(ji)，細胞大多無(wu)法立(li)即適應(ying)(ying)，造成細胞無(wu)法存活。