粗制膠原酶(mei)(mei)制劑(ji)含(han)有兩種不(bu)同膠原酶(mei)(mei)的(de)幾種亞型：一(yi)(yi)種巰基蛋白酶(mei)(mei)、梭(suo)菌(jun)蛋白酶(mei)(mei)、一(yi)(yi)種胰蛋白酶(mei)(mei)樣酶(mei)(mei)和(he)一(yi)(yi)種氨肽(tai)酶(mei)(mei)。這種膠(jiao)原蛋白水解(jie)和(he)蛋白水解(jie)活性的結合(he)可(ke)有(you)效分(fen)解(jie)細胞(bao)間(jian)基(ji)質，這是(shi)組織解(jie)離的重要部分(fen)。該(gai)復合物(wu)的(de)一個成(cheng)分是水(shui)解酶(mei)，它(ta)優先降解序列 Pro-Y-Gly-Pro 中的(de) Y-Gly 鍵(jian)處(chu)的(de)天然膠(jiao)原蛋白(bai)的(de)螺旋區(qu)域，其中 Y 最常見(jian)的(de)是中性(xing)氨基酸。這種裂解產(chan)生的產(chan)物易于進(jin)一步被肽酶消化。粗膠原酶會(hui)被半胱(guang)氨酸、EDTA 或鄰菲咯啉等金屬螯合劑抑制，但(dan) DFP 不會(hui)。它還受到(dao)α2-巨球蛋白（一種(zhong)大(da)的血(xue)漿糖蛋白）的抑制。Ca2+ 是酶活性(xing)所必(bi)需的。每種膠原酶的(de)(de)特定酶譜與(yu)獲得研(yan)究細胞的(de)(de)組織(zhi)（或與(yu)細胞的(de)(de)用(yong)途）相(xiang)關，并且由于這種相(xiang)關性，沃辛頓(dun)建立了(le)幾種類型的(de)(de)粗(cu)制膠原酶：類型 1、2、3 和 4。

• 1 型粗(cu)膠原酶(mei)具有膠原酶(mei)、酪蛋白酶(mei)、梭菌蛋白酶(mei)和(he)胰蛋白酶(mei)活(huo)性的原始平衡。
• 2 型含有較高相對(dui)水(shui)平的蛋白酶(mei)活性，特別是梭菌蛋白酶(mei)。
• 3 型含(han)有很低水平的次級蛋白酶。
• 4 型的胰(yi)蛋白酶活性特別低，以限制對(dui)膜(mo)蛋白和(he)受體的(de)損害。
• 5 型 含(han)有較高的膠原(yuan)酶和(he)酪蛋(dan)白酶值。
• 6 型 含有(you)高膠原(yuan)酶活性(xing)，酪蛋白(bai)酶與膠原(yuan)酶的比(bi)例(li)約為 2:1。相對于 I 型 ( G列 ) 而言，旨在富集 II 型 ( H列 ) 膠(jiao)原酶。
• 7 型 膠原酶和酪蛋白酶活性(xing)比 1 型和 2 型膠原酶高四倍。

•純化(hua)的膠原酶，代碼：CLSPA，含(han)有極低的次級蛋白水(shui)解活(huo)性以及(ji)高膠原酶活(huo)性。

Worthington 還提供每種(zhong)類(lei)型的 0.22 µm 過濾制劑(ji)，以(yi)預(yu)包裝形式直接重構并(bing)用于細(xi)胞分離(li)和培(pei)養程序(xu)。酶(mei)類型和不同組織的(de)有效性(xing)之間的(de)相關性(xing)良好，但并不很好，部分原(yuan)因是使(shi)用參數(shu)的(de)可變性(xing)。盡管如此，大多數研(yan)究人員認為粗制膠原酶批次的(de)組織分型是一項有價值的(de)服務。關于(yu)沃辛頓(dun)(dun)膠原酶和污染物測定的(de)詳(xiang)細說明可以在沃辛頓(dun)(dun)酶手冊中(zhong)找到(dao)。此外，組織特定(ding)的(de)參考資料和詳細(xi)的(de)分離條(tiao)件(jian)可以在(zai)《沃辛頓組織解離指(zhi)南》中找到(dao)。

膠原酶測(ce)定是Mandl的改進，其(qi)中將膠原酶與天然膠原一起溫育5小時，并且使用Moore和Stein， JBC，176，367，(1948)比(bi)色茚三(san)酮(tong)方法測定膠原分解的程度。釋放(fang)的氨基酸以每毫克膠原酶的微(wei)摩爾亮氨酸表(biao)示(shi)。

用途：粗(cu)膠原酶(mei)(mei)廣泛用于酶(mei)(mei)促原代細胞分離和(he)組織解離程序。大多數研究人員使用(yong)粗制(zhi)膠(jiao)原酶制(zhi)劑，例如 1、2、3 和 4 型(xing)或色譜純化(hua)的膠(jiao)原酶（代碼：CLSPA）；后者通常與彈(dan)性蛋白酶、透明質(zhi)酸酶等輔助酶結合(he)。為(wei)了獲得(de)最(zui)佳結果，必須(xu)根據待解(jie)離的(de)組織定(ding)制蛋白水解(jie)活(huo)性的(de)精(jing)確混(hun)合(he)物。不(bu)同(tong)組織的(de)類型和有效性(xing)之間的(de)相(xiang)關性(xing)良好(hao)(hao)，但(dan)并(bing)不(bu)很好(hao)(hao)，并(bing)且可(ke)能部分(fen)取決(jue)于使用參數和目標以及(ji)批次(ci)之間的(de)差異。有關更多信息，請參閱膠(jiao)原酶(mei)采樣計劃信息。沃辛頓還(huan)出版了《組織解離指南》，其中(zhong)提供了有關用(yong)于這(zhe)些(xie)應(ying)用(yong)的(de)(de)酶(mei)的(de)(de)更多信息(xi)以(yi)及多種細胞和組織(zhi)類(lei)型的(de)(de)具體參考(kao)。

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