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經常用的(de)預處理方法是沉淀(dian)(dian)(dian)法。對于腹水中的(de)脂(zhi)(zhi)蛋白(bai)，常用硫酸(suan)右旋葡糖酐沉淀(dian)(dian)(dian)，或(huo)(huo)是在pH=7時(shi)，采用PVP沉淀(dian)(dian)(dian)b-脂(zhi)(zhi)蛋白(bai)和球蛋白(bai)。上樣(yang)時(shi)若腹水樣(yang)品太粘稠(chou)可以(yi)使用上樣(yang)緩沖液(ye)稀釋(shi)樣(yang)品。對于白(bai)蛋白(bai)等雜(za)蛋白(bai)，可以(yi)使用分級沉淀(dian)(dian)(dian)法去除，如硫酸(suan)銨沉淀(dian)(dian)(dian)、羊脂(zhi)(zhi)酸(suan)沉淀(dian)(dian)(dian)等。利用脫鹽柱或(huo)(huo)透析可以(yi)除去鹽離子并更換緩沖液(ye)。 （1）通常采用沉淀法結合凝膠過濾法純化IgM，但對于大量純化抗體，這種方案繁瑣且產量低。 （1）Protein L可以特異性的結合抗體的κ輕鏈，因此，只要Fab 片段中含有κ輕鏈，就可以選擇Protein L填料進行純化。 （1）更換親和力更高的填料。 （1）首先看樣品是否結合，抗體種屬亞型與親和填料是否有親和力，結合緩沖液pH是否中性，流穿中抗體是否有減少，可將原始樣品和流穿同時跑SDS-PAGE電泳進行分析。 （1）洗雜是否全部？可取最后洗雜液跑SDS-PAGE電泳進行分析。 （1）血清可先用Protein G預處理，在培養前除去IgG。或選用IgG含量較低的血清。如何對血清、腹水、培養物上清液等來源的抗體樣品進行預處理？
純化不與Protein A或G結合的IgM、IgY該怎么選擇填料？
（2）采用Protein L親和填料，特異性的結合κ輕鏈，對純化抗體片段及完整地抗體IgG、IgM和IgA很有用。
（3）嗜(shi)硫填料是(shi)根據其配基(ji)與抗體(ti)間的二硫鍵產生特(te)異性(xing)相互作用，中性(xing)條件下吸附(fu)、洗(xi)脫，純化后蛋白活性(xing)高(gao)，是(shi)一種通用型抗體(ti)純化手段。怎么純化抗體Fab 片段？
（2）Protein G 除了可以特異性結合IgG 的Fc 片段，還可以特異性低親和的與某些抗體Fab片段結合。
（3）Protein A只結合(he)IgG的Fc片(pian)段。采用(yong)流(liu)(liu)穿(chuan)模式，將純的IgG酶解后過Protein A填料，Fab在流(liu)(liu)穿(chuan)峰，Fc片(pian)段結合(he)在填料上。如何提高抗體回收率？
（2）對于Protein A填料，結合pH可以升至8-9。
（3）填(tian)料(liao)多(duo)次使用后殘留(liu)物(wu)增(zeng)多(duo)，載(zai)量(liang)降低，建議用6M鹽(yan)酸胍或70%乙醇清洗填(tian)料(liao)。對于耐堿填(tian)料(liao)可(ke)以使用0.1-0.5M NaOH清洗。為什么洗脫液中沒有正確條帶？
（2）再看樣品是否與填料結合太牢固，沒有洗脫下來，建議用pH更低的緩沖液洗脫。
（3）洗脫(tuo)后(hou)酸性(xing)(xing)條(tiao)件下抗體是否水解(jie)，可在收集管中預先加入(ru)中和(he)液或精(jing)氨酸等保(bao)護劑，或者選(xuan)擇能在近(jin)中性(xing)(xing)條(tiao)件下洗脫(tuo)的填料(liao)。洗脫后抗體純度不高怎么辦？
（2）適當提高結合時鹽離子濃度，或在洗雜液中加入低濃度的非離子型去垢劑，降低非特異性吸附。
（3）上樣前樣品預處理，除去部分雜質。
（4）采用兩步純(chun)化(hua)，先親和層析純(chun)化(hua)，后經(jing)離子(zi)交換層析，除去HCP 、脫落(luo)的(de) Protein A以及部分(fen)聚(ju)體等等，得到純(chun)度更高的(de)抗體。體外培養表達IgG，如何避免培養基中如小牛血清IgG干擾？
（2）樣品(pin)先用Protein A或G純(chun)化，得(de)到的抗體再經過疏水層析除(chu)去(qu)牛(niu)IgG。
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