處理培養細胞

從 19 世紀末開始，科學家們就從各(ge)種生物體（例(li)如人類、小(xiao)鼠、豬(zhu)、雞(ji)和植物）中(zhong)分離出(chu)自然環境中(zhong)的細(xi)胞，并將它(ta)們置于體外（拉(la)丁語(yu)“玻璃中"）中。 ） 文化。實驗細胞是從許多不同的組織和(he)(he)器官中(zhong)提取的，例如(ru)腸、腎、血液、腦(nao)、乳腺(xian)和(he)(he)許多癌癥實體。

體外培養細胞的目的是模(mo)擬培(pei)養箱內的(de)體(ti)內（拉丁語“活體(ti)中(zhong)"）條件，或(huo)者在進行活細胞成像時甚(shen)至(zhi)在顯微鏡下模擬體(ti)內(nei)條件。每種細胞類(lei)型都需要(yao)定制培(pei)養(yang)參數，以實現最佳的健康、活力和生(sheng)長(chang)。對于所有(you)實驗，保持(chi)條件無菌、均質和可(ke)重(zhong)(zhong)復至關重(zhong)(zhong)要，以獲(huo)得(de)可(ke)比較的結果(guo)。

傳代、接種和冷凍細胞

為了保持細胞處于增殖狀態，并防止它(ta)們達到過度匯(hui)合，以規定(ding)的時間間隔進行傳(chuan)代非(fei)常重要。必須(xu)定期進行細(xi)胞傳代(dai)，以保持細(xi)胞處于(yu)培養(yang)狀態、實現體積放大或在(zai)實驗開(kai)始時接種它們。該過程也稱為細胞分裂或傳代培養(yang)。除其他因素外(wai)，傳(chuan)代(dai)的最(zui)佳時間取決于增殖率以及所需的細胞數(shu)量。每種細胞類型(xing)的確切裂解方案都(dou)是的。一(yi)般來說，貼壁(bi)細胞使用蛋白水解酶(mei)（主要是(shi)胰(yi)蛋白酶(mei)/EDTA）從基(ji)質上分離，這對于消化其(qi)蛋白質附(fu)著鍵是(shi)必需的。接(jie)下(xia)來，將(jiang)細胞勻漿、計數并接(jie)種(zhong)到新容器(qi)中，從而(er)將(jiang)傳代次(ci)數增加一(yi)倍(bei)。

傳(chuan)代/傳(chuan)代=將細胞轉移到新(xin)鮮(xian)的培(pei)養皿(min)和生長培(pei)養基中

一些細(xi)(xi)胞(bao)系(xi)，例如 HeLa 或其他缺(que)乏細(xi)(xi)胞(bao)周期調節(jie)的癌細(xi)(xi)胞(bao)，可以無限傳(chuan)代(dai)而(er)不(bu)喪(sang)失分裂(lie)能力（永生細(xi)(xi)胞(bao)系(xi)）。此外(wai)，某些胚胎細胞類型或多能(neng)干細胞也是如此。其(qi)他細(xi)胞，特別是(shi)原代(dai)細(xi)胞（例如，從成體器官中(zhong)分離的(de)細(xi)胞），在幾次(ci)傳代(dai)后將失去這種能力，因為它們(men)要么經歷衰老，要么分化，要么死(si)亡(wang)。因(yin)此(ci)，使用具有相似傳代數的細胞進行可重復的實驗非(fei)常重要。

對于(yu)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)接(jie)種(zhong)，需要選擇適合各(ge)自細胞(bao)(bao)(bao)(bao)類型(xing)、細胞(bao)(bao)(bao)(bao)培(pei)養容(rong)器和實驗(yan)裝置的(de)密(mi)度(du)(du)。如果密(mi)度(du)(du)太低，細胞(bao)(bao)(bao)(bao)可(ke)能會(hui)由于(yu)生長(chang)因(yin)子釋(shi)放到(dao)培(pei)養基(ji)中不(bu)足而停止生長(chang)。缺乏(fa)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)間和細胞(bao)(bao)(bao)(bao)間基(ji)質(zhi)(zhi)通訊的(de)單(dan)個細胞(bao)(bao)(bao)(bao)甚(shen)至(zhi)可(ke)能因(yin)一種(zhong)特殊形式的(de)程序性(xing)細胞(bao)(bao)(bao)(bao)死(si)亡（稱為失巢凋亡）而死(si)亡。如果接(jie)種(zhong)密(mi)度(du)(du)太高，細胞(bao)(bao)(bao)(bao)可(ke)能在很短的(de)時(shi)間內(nei)就已經達到(dao)過度(du)(du)匯合。這會(hui)導致增殖受損(sun)和細胞(bao)(bao)(bao)(bao)與基(ji)質(zhi)(zhi)分離(li)，從(cong)而導致實驗(yan)條件不(bu)可(ke)重現。

標準細(xi)(xi)胞(bao)類型(xing)可在(zai) –80°C 下短期保存，或在(zai)液氮(dan)中長期保存。為此(ci)，需要(yao)對細(xi)(xi)胞(bao)進行(xing)(xing)胰蛋(dan)白酶化(hua)、均質化(hua)和離心，然后使用特殊的(de)冷凍介質進行(xing)(xing)冷凍。為了對抗此(ci)過程(cheng)(cheng)引起的(de)細(xi)(xi)胞(bao)應激，建議使用具(ju)有高回收率的(de)冷凍介質。此(ci)外，解凍過程(cheng)(cheng)必須快(kuai)速進行(xing)(xing)（例如，在(zai)37°C的(de)水浴中），然后將細(xi)(xi)胞(bao)轉(zhuan)移到培養基中并將其放(fang)入(ru)培養箱中以創造生理條件(jian)。

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