1.    BCA法測定試劑盒

堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。不方便的是這種方法需要提前制作標準曲線。BCA蛋白質測定方法靈敏度高，操作簡單，試劑及其形成的顏色復合物穩定性俱佳。BCA方法適用于表面活性劑存在下的蛋白質濃度檢測，可兼容高達5%的SDS，TritonX-100及Tween等。然而，由于BCA方法依靠銅離子進行顯色反應，如果溶液中含有與銅離子反應的螯合劑比如EDTA或者還原性試劑比如DTT、β-巰基乙醇，結果將受到很大程度的影響。同時，BCA方法的檢測結果(guo)也(ye)會受(shou)到蛋(dan)白質內半胱氨酸，酪氨酸，色氨酸含量(liang)的影響。

2.    Bradford法(fa)

該方法的原理是，帶負電的考馬斯亮藍染料與蛋白質中堿性氨基酸相互作用。考馬斯亮藍在溶液中顯紅色，吸收峰在465nm處，當與蛋白質結合后，其顯藍色，在595nm處有吸收峰。595nm處(chu)的吸光值與(yu)蛋白(bai)質的濃度(du)呈正比。

Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。樣品中巰基乙醇的濃度可高達1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達5mM。但受略高濃度的去垢劑影響。需確保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。

3.    UV280法

這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。選擇Warburg 公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應的換算方法，將吸光值轉換為樣品濃度。蛋白質測定過程非常簡單，先測試空白液，然后直接測試蛋白 質。從而顯得結果很不穩定。蛋白質直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單；但是容易受 到平行物質的干擾，如DNA的干擾(rao)；另外敏感度(du)低(di)，要求蛋白的濃度(du)較高。

1）簡易經驗公式

蛋白質濃度(mg/ml) = [1.45*OD280-0.74*OD260 ] * Dilution factor 

2）精確計算

通過計算OD280/OD260的比值，然后查表得到校正因子F，再(zai)通過如(ru)下公式(shi)計算(suan)最終結果(guo)：

蛋白質濃度(mg/ml) = F *(1/d) *OD 280 * D

其中d為測定OD值比色杯的厚度

D為溶液的稀釋倍數

4.    Lowry法(fa)

     蛋(dan)白(bai)質在堿性溶液(ye)中其肽(tai)鍵與Cu2+螯合(he)，形(xing)成(cheng)蛋(dan)白(bai)質一銅復合(he)物(wu)，此復合(he)物(wu)使酚試劑的(de)磷鉬(mu)酸還原，產(chan)生藍(lan)色化合(he)     ;    物(wu)，在一定(ding)條件下(xia)，利用(yong)藍(lan)色深淺(qian)與蛋(dan)白(bai)質濃度的(de)線性關系作標準曲線并(bing)測定(ding)樣品中蛋(dan)白(bai)質的(de)濃度。

     5、考馬(ma)斯亮藍（Coomassie Brilliant Blue）法(fa)

考馬斯亮藍法測定(ding)蛋白(bai)質(zhi)(zhi)濃度，是利用蛋白(bai)質(zhi)(zhi)―染(ran)料(liao)結合的原理，定(ding)量(liang)(liang)的測定(ding)微(wei)量(liang)(liang)蛋白(bai)濃度的快速、靈敏的方法。

考馬斯亮藍G―250存在(zai)著兩種不同的顏(yan)色(se)(se)(se)形式(shi)，紅(hong)色(se)(se)(se)和藍色(se)(se)(se)。它和蛋白(bai)(bai)質通過范德華力結(jie)合(he)，在(zai)一定(ding)蛋白(bai)(bai)質濃度(du)范圍         內，蛋白(bai)(bai)質和染料(liao)結(jie)合(he)符合(he)比爾定(ding)律（Beer’s law）。此染料(liao)與蛋白(bai)(bai)質結(jie)合(he)后顏(yan)色(se)(se)(se)有紅(hong)色(se)(se)(se)形式(shi)和藍色(se)(se)(se)形式(shi)，最大光         吸收(shou)由465nm變成595nm，通過測定(ding)595nm處光吸收(shou)的增加量(liang)可知(zhi)與其結(jie)合(he)蛋白(bai)(bai)質的量(liang)。

蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)和染(ran)料(liao)結(jie)合(he)是一(yi)個(ge)很快的過程(cheng)，約2min即可反應*，呈現(xian)最大光吸(xi)收，并可穩定(ding)(ding)1h，之后(hou)，蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)―染(ran)料(liao)復(fu)         合(he)物發生聚合(he)并沉淀(dian)出(chu)來。蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)―染(ran)料(liao)復(fu)合(he)物具有很高(gao)的消(xiao)光系數(shu)，使得在測定(ding)(ding)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)濃度(du)(du)時(shi)靈敏(min)度(du)(du)很高(gao)，在測定(ding)(ding)           溶液中含(han)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)5µL/ml時(shi)就有0.275光吸(xi)收值(zhi)的變化(hua)，比(bi)Lowry法(fa)(fa)靈敏(min)4倍，測定(ding)(ding)范(fan)圍為10-100µg蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)，微量測定(ding)(ding)         法(fa)(fa)測定(ding)(ding)范(fan)圍是1－10µg蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)。此反應重復(fu)性好，精確(que)度(du)(du)高(gao)，線性關系好。標準曲(qu)線在蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)濃度(du)(du)較大時(shi)稍有彎曲(qu)，         這是由于染(ran)料(liao)本(ben)身的兩種顏色形式光譜有重疊，試劑背景值(zhi)隨更多染(ran)料(liao)與蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)(zhi)(zhi)結(jie)合(he)而不斷降低，但(dan)直線彎曲(qu)程(cheng)度(du)(du)很         輕，不影響測定(ding)(ding)。

此方法干(gan)擾物少，研究表明：NaCl，KCl，MgCl2，乙醇，（NH4）2SO4無干(gan)擾。強堿緩沖液在(zai)測定中有(you)一些顏(yan)色         干(gan)擾，這可以用適(shi)當的(de)緩沖液對照扣(kou)除其影響(xiang)。Tris，乙酸(suan)，2―巰(qiu)基乙醇，蔗糖(tang)，甘油，EDTA及微量(liang)的(de)去污(wu)劑如                Triton X―100，SDS，玻璃去污(wu)劑有(you)少量(liang)顏(yan)色干(gan)擾，用適(shi)當的(de)緩沖液對照很容易除掉。但是，大(da)量(liang)去污(wu)劑的(de)存在(zai)對           顏(yan)色影響(xiang)太大(da)而不(bu)易消除。