對于(yu)(yu)血清(qing)、腹水和組織培(pei)養上(shang)清(qing)的(de)(de)澄清(qing),離心和過(guo)濾(lv)是基本的(de)(de)實驗室技(ji)術。這些(xie)技(ji)術可以去除會阻塞層析柱(zhu)的(de)(de)脂(zhi)類(lei)和小顆粒物(wu)質。對于(yu)(yu)某些(xie) 樣品,緩(huan)沖液置換(huan)和除鹽也是必要的(de)(de)步(bu)(bu)(bu)驟。硫(liu)酸銨沉(chen)淀作為(wei)更進(jin)一(yi)步(bu)(bu)(bu)的(de)(de)預處理步(bu)(bu)(bu)驟,經常(chang)用于(yu)(yu)濃(nong)縮腹水中的(de)(de)免(mian)疫球蛋白。
抗血清
多(duo)克隆抗(kang)(kang)(kang)體通常是未經(jing)純化的(de),稱為(wei)血(xue)清或抗(kang)(kang)(kang)血(xue)清。抗(kang)(kang)(kang)血(xue)清是指已經(jing)除(chu)去了凝(ning)血(xue)蛋(dan)白(bai)和(he)血(xue)紅細胞的(de)免(mian)疫宿(su)主的(de)血(xue)液(ye)。抗(kang)(kang)(kang)血(xue)清包(bao)含所有種類的(de) 抗(kang)(kang)(kang)體/免(mian)疫球(qiu)蛋(dan)白(bai)以及其它(ta)血(xue)清蛋(dan)白(bai)。它(ta)所包(bao)含的(de)不僅有識(shi)別靶抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)的(de)抗(kang)(kang)(kang)體,還有識(shi)別非(fei)靶抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)的(de)抗(kang)(kang)(kang)體,在(zai)免(mian)疫分(fen)析中(zhong)有時會發(fa)生非(fei)特異性(xing)反(fan) 應。由于(yu)這個原(yuan)因,粗(cu)制抗(kang)(kang)(kang)血(xue)清通常要(yao)進行純化,以去除(chu)血(xue)清蛋(dan)白(bai),增加能特異和(he)靶抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)相結合(he)的(de)免(mian)疫球(qiu)蛋(dan)白(bai)的(de)比例。
組織培養上清
單(dan)克隆抗(kang)體(ti)(ti)可(ke)以通(tong)(tong)過雜(za)交(jiao)瘤(liu)細(xi)胞培養(yang)(細(xi)胞分泌性(xing)抗(kang)體(ti)(ti))并收獲雜(za)交(jiao)瘤(liu)組織培養(yang)上清來獲得(de)。腹(fu)水單(dan)克隆抗(kang)體(ti)(ti)可(ke)以通(tong)(tong)過在小(xiao)鼠(或大鼠)的(de)腹(fu)腔中生(sheng)長雜(za)交(jiao)瘤(liu)細(xi)胞而產(chan)生(sheng)。雜(za)交(jiao)瘤(liu)細(xi)胞注射入(ru)小(xiao)鼠以后,就會在小(xiao)鼠腹(fu)腔繁殖并產(chan)生(sheng)液體(ti)(ti)(腹(fu) 水)。這種(zhong)腹(fu)水就包(bao)含了高濃(nong)度的(de)可(ke)收獲抗(kang)體(ti)(ti),比雜(za)交(jiao)瘤(liu)細(xi)胞培養(yang)有更高的(de)抗(kang)體(ti)(ti)產(chan)量。
抗體純化
多克隆抗血(xue)清或單克隆腹(fu)水/組織培養(yang)上清通常(chang)通過下述三種(zhong)方法(fa)中的一種(zhong)來進(jin)行純(chun)化:
1.蛋白A/G純化
蛋(dan)白(bai)(bai) A/G 純(chun)化是(shi)應用金黃色葡(pu)萄球菌的(de)蛋(dan)白(bai)(bai) A 或鏈球菌的(de)蛋(dan)白(bai)(bai) G 對免(mian)疫球蛋(dan)白(bai)(bai) Fc 段(duan)的(de)高親(qin)和性。蛋(dan)白(bai)(bai) A/G 純(chun)化從粗制抗血(xue)清中去(qu)除(chu)了血(xue)清 蛋(dan)白(bai)(bai),但(dan)沒有去(qu)除(chu)非(fei)特異的(de)免(mian)疫球蛋(dan)白(bai)(bai)組分。結果蛋(dan)白(bai)(bai) A/G 純(chun)化的(de)抗血(xue)清仍然具有一小部分不期(qi)待的(de)交(jiao)叉反應性。
2.親和純化
親(qin)和(he)純化(hua)就是通過(guo)相似性分離(li)某一特(te)定蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)或具有(you)相似特(te)征(zheng)的(de)一組蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)。這種(zhong)分離(li)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)技術是基于在蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)和(he)耦合(he)于層(ceng)析(xi)介(jie)質上(shang)的(de)特(te)定配(pei)基 之間的(de)一種(zhong)可逆的(de)相互作用。 抗原親(qin)和(he)純化(hua)的(de)優勢(shi)是免疫球(qiu)(qiu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)能(neng)夠特(te)異(yi)(yi)性地同刺激(ji)它產生(sheng)的(de)抗原進(jin)行結合(he),結果消除(chu)了大(da)量(liang)的(de)非(fei)特(te)異(yi)(yi)免疫球(qiu)(qiu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)成(cheng)分,將(jiang)能(neng)特(te)異(yi)(yi)與靶抗 原相結合(he)的(de)免疫球(qiu)(qiu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)成(cheng)分富(fu)集。因此(ci)親(qin)和(he)純化(hua)后獲(huo)得(de)的(de)主要(yao)是含所期待的(de)特(te)異(yi)(yi)性免疫球(qiu)(qiu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)。
3.預吸附
多克隆抗(kang)體(ti)有時要經過預吸(xi)附(fu)。也就是說它們要被不(bu)同物種來(lai)源的(de)其它蛋白或(huo)血(xue)清吸(xi)附(fu),以消除可(ke)能的(de)交叉(cha)反(fan)應(ying)(ying)的(de)抗(kang)體(ti)。這樣(yang)純化后的(de)抗(kang)體(ti) 純度和(he)特異性應(ying)(ying)很高,任何交叉(cha)反(fan)應(ying)(ying)都被顯著減少。
北京和一(yi)生(sheng)(sheng)物科(ke)技有限公(gong)司是(shi)一(yi)家集進口(kou)試劑(ji)銷(xiao)售、技術服務(wu)與合約開發(fa)為(wei)一(yi)體的高科(ke)技公(gong)司,旨在為(wei)生(sheng)(sheng)命科(ke)學的發(fa)展提供全面的產品與服務(wu)。產品及服務(wu)項(xiang)目覆蓋生(sheng)(sheng)物化學、細胞生(sheng)(sheng)物學、免疫學、植物學、分子生(sheng)(sheng)物學、蛋白組(zu)學、生(sheng)(sheng)物制藥與診斷試劑(ji)研發(fa)生(sheng)(sheng)產等領域。
北京和一生物科技有限公司代理Avidity全系列產品,專營進口生物試劑,科學儀器,實驗消耗品,化工原料及藥物中間體等。公司與諸多國外品牌簽下代理,sigma、santa、RD、Avidity、CST、toxin、streck、Avidity、ebioscience、saracare、polyplus、Bethyl、Novus、moltox等,能為廣大科研用戶提供數萬種試劑、儀器和實驗消耗品。
我們公司的優勢:
1)質量優勢:在美(mei)國成立有(you)辦事(shi)處,所有(you)產品均為原廠進口,產品質量有(you)保障
2)貨期優勢:常賣產品(pin)備有現貨,滿足客戶快(kuai)速(su)開展實驗的(de)需求
3)價格優勢:同行業(ye)同類產品擁有更好的(de)性價比,歡迎新老(lao)客戶咨詢
4)信譽良好:客戶范圍廣(guang),包括清華(hua)大學,北京大學,西湖大學,藥明康(kang)德,康(kang)龍化成等多所高(gao)校及企業