配對(dui)抗體(ti)指的(de)是(shi)可以同時結合在一個抗原分子上的(de)兩個抗體(ti)。配對(dui)抗體(ti),一般應用于雙抗夾心(xin)法 ELISA 實(shi)驗。
抗體配(pei)對(dui)的原理
通常情況下,一個抗原分子擁有多個抗原決定簇,將抗原注射入動物體內進行免疫,針對不同的抗原決定簇會產生不同的抗體。產生的抗體具有特異性與專一性,即一個抗體分子只會特異性地結合一個抗原決定簇。兩個針對不同抗原決定簇的抗體,有可能同時結合到抗原分子上。如果兩個抗體同時結合到同一個抗原分子上,那么這兩個抗體就是配對抗體。
配對抗體的(de)制備與篩選(xuan)
需要注意的是,即使兩個抗體針對的是不同的抗原決定簇,也并不意味著這兩個抗體分子一定可以同時與抗原分子結合。當一個抗體與抗原結合后,有可能會導致其他結合位點(抗原決定簇)構型的改變,從而導致其他的抗體無法正常結合到抗原上。位阻效應的存在,也可能使兩個結合位點距離較近的抗體無法同時結合在抗原上。因此想要得到可以同時結合在抗原分子上的配對抗體,在制備出抗體后,還需要對得到的抗體進行篩選。這就意味著,要制備配對抗體,要完成以下兩步工作:抗體的制備;配對抗體的篩選。
抗體制備(bei)
為了便于后續的篩選,制備的抗體應為單克隆抗體,通常利用雜交瘤技術進行單克隆抗體的制備。 注意:如果單克隆抗體很少,很可能會找不到可以配對的抗體,因此,在免疫動物的時候,應多免疫幾只動物,以獲得更多的單克隆抗體。
配對抗體的篩選
通常,配對抗體篩選的方法是雙抗夾心 ELISA 法。篩選的原理為:在得到了單克隆抗體后,從中取出兩種單克隆抗體,一種作為捕獲抗體,另一種作為標記抗體(HRP 酶標記),將捕獲抗體包被在抗原板上,先加入抗原,孵育后洗去未結合的抗原,再加入標記抗體 孵育后洗去未結合的標記抗體,最后加入顯色液顯色。如果可以顯色,說明標記抗體與抗原特異性結合,該捕獲抗體與標記抗體為一對配對抗體。如果不能顯色,說明標記抗體不能與抗原結合,從而被洗脫,該捕獲抗體與標記抗體不是配對抗體。如果選擇的兩種單克隆抗體不能進行配對,則需重新選擇兩種單抗,重新進行試驗,直至找出可以配對的抗體。
配對抗體(ti)的(de)應(ying)用
利用雙抗夾心法對目的抗原進行定性定量的檢測,必須要用到可以同時與目的抗原結合的配對抗體。對于比較常見的目的抗原,可以通過購買試劑盒的方式得到相應配對抗體。但是市面上試劑盒的種類有限,有些目的蛋白在市面上無法買到對應的試劑盒,為了進行雙抗夾心法 ELISA 實驗,需進行相應的配對抗體的生產。
北京和一(yi)生(sheng)物(wu)科技(ji)(ji)有限(xian)公(gong)司是一(yi)家集進(jin)口試劑銷售(shou)、技(ji)(ji)術服務(wu)與(yu)(yu)合約開(kai)發(fa)為一(yi)體(ti)的(de)高科技(ji)(ji)公(gong)司,旨在為生(sheng)命(ming)科學(xue)(xue)的(de)發(fa)展提(ti)供全面(mian)的(de)產(chan)品與(yu)(yu)服務(wu)。產(chan)品及(ji)服務(wu)項目(mu)覆蓋生(sheng)物(wu)化學(xue)(xue)、細胞生(sheng)物(wu)學(xue)(xue)、免疫學(xue)(xue)、植物(wu)學(xue)(xue)、分(fen)子生(sheng)物(wu)學(xue)(xue)、蛋(dan)白組學(xue)(xue)、生(sheng)物(wu)制藥與(yu)(yu)診斷(duan)試劑研發(fa)生(sheng)產(chan)等(deng)領域。
北京和一生物科技有限公司代理Avidity全系列產品,專營進口生物試劑,科學儀器,實驗消耗品,化工原料及藥物中間體等。公司與諸多國外品牌簽下代理,sigma、santa、RD、Avidity、CST、toxin、streck、Avidity、ebioscience、saracare、polyplus、Bethyl、Novus、moltox等,能為廣大科研用戶提供數萬種試劑、儀器和實驗消耗品。