設備及(ji)材料

• 1,2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸(suan)乙醇胺

• 陽離子脂質

• 氯仿

• 蒸餾(liu)水

• 緩沖

• 帶聚四(si)氟乙烯(xi)內襯的玻璃瓶

• 玻璃注射(she)器

• 氮氣或氬(ya)氣

• 真(zhen)空系統

• 0.22μm 過濾器（可(ke)選）

程序

1. 將(jiang)每(mei)種脂質(zhi)成分（例如，DOTAP/DOPE）溶解在氯仿中至方便的工作濃(nong)度（1-10mg/mL）。

2. 使用玻璃注射器(qi)將所需量的每(mei)種成分(fen)等分(fen)到(dao)玻璃瓶(ping)中。有(you)關處理(li)脂質有(you)機溶(rong)液的(de)更多信(xin)息。

3. 全部混合(he)玻璃瓶中的成分(fen)。

4. 使用(yong)氮氣(qi)(qi)或氬氣(qi)(qi)流小心地(di)蒸發氯仿（在充分通風(feng)的情況下）。

5. 將脂(zhi)質殘留物放在真空泵上 10-15 分鐘(zhong)，以除去任何殘留的有機溶劑(ji)。

6. 從真空(kong)泵中取出小(xiao)瓶，并立即以最終(zhong)脂質(zhi)濃度的兩倍(bei)懸浮在(zai)蒸餾水中。

7. 將脂質分散體超聲(sheng)處理至澄清（2-5 分鐘）。

8. 添加等體積的緩沖液（例如，308mM NaCl、40mM Hepes、pH7.4），并(bing)進一步超聲處理 2 分鐘。

9. 溶液可通過 0.22μm 過濾器進行(xing)滅菌。

脂(zhi)質/DNA 混合物的制備

1. 將陽離子脂質(zhi)分散體與 DNA（每 10μg 脂質(zhi) 1μg）混合(he)(he)在合(he)(he)適的(de)容器(qi)中。

2. 將脂質/DNA 混合物(wu)孵育 5 分鐘。在(zai)室溫(wen)下。

3. 5 分(fen)鐘(zhong)后，混合物(wu)即(ji)可用(yong)于轉染細胞(bao)。

細胞轉染

1. 用 HEPES 緩沖鹽水洗滌細胞單(dan)層(ceng)兩(liang)次。

2. 將細胞(bao)與脂質/DNA 混合(he)物在 HEPES 緩沖鹽水（每 100 mm 培養(yang)皿(min) 3 ml 混合(he)物）中于 37°C 孵育 90 分鐘。

3. 孵育期結束后，根據(ju)需要更換培養基或補(bu)充。

4. 將細(xi)胞培養所需的時間并收獲。

筆記

• DOPE:陽離(li)子脂質的常見摩爾比為3:1和1:1。在某(mou)些情況下(xia)，全部(bu)由(you)陽離(li)子脂質組成的(de)脂質系統已被用于轉染細胞。

• 所(suo)引用的緩沖系統旨在用于體外(wai)使用，并不表明該系(xi)統可能適(shi)合體內(nei)使用。

參考

• Leventis, R. 和 Silvius, JR (1990)。生物化(hua)學。生(sheng)物(wu)物(wu)理學。Acta 1023：124-132。

 Avanti   品牌

1,2-二(er)油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺    850725P

以(yi)下規格：

850725P-25MG   

850725P-200MG

850725P-500MG

850725P-1G