細(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)是大(da)多(duo)數生物實(shi)驗(yan)室都會遇(yu)到的(de)基礎實(shi)驗(yan)，但(dan)不(bu)是非常(chang)簡單的(de)實(shi)驗(yan)。細(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)蘊含著大(da)學問。細(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)狀態不(bu)好(hao)相(xiang)信每個細(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)者都遇(yu)到過。有(you)時(shi)候細(xi)(xi)胞狀態不(bu)好(hao)，轉染 、藥(yao)篩這些實(shi)驗(yan)根(gen)本就沒辦法做。影(ying)響(xiang)細(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)的(de)因素很多(duo)，但(dan)首要因素是選好(hao)合適的(de)細(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)基。很多(duo)研究者只對一兩種培(pei)養(yang)(yang)基比較(jiao)了解，下面讓我們詳細(xi)(xi)介紹一下各(ge)種培(pei)養(yang)(yang)基的(de)不(bu)同之(zhi)處。

培養基

      基礎(chu)培(pei)養基絕大(da)多數是建立在平(ping)衡鹽溶液（BSS）基礎(chu)上，添加了氨基酸(suan)、維(wei)生素和其它與血清中濃度相似的營養物質。廣泛(fan)應用的基礎(chu)培(pei)養基是MEM ，其中含有13種必須氨基酸(suan)、8種維(wei)生素。

   目前科研市場經(jing)典的培(pei)養(yang)(yang)基有很多種，其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都(dou)是應用廣(guang)泛的培(pei)養(yang)(yang)基。其他如M199、IMDM、L15培(pei)養(yang)(yang)基等也(ye)用于某些細胞的培(pei)養(yang)(yang)。

◆ MEM是由基礎(chu)培養基(BME)發展而來的(de)，其中增加(jia)了(le)組分的(de)范圍及濃度(du)。

◆ 改良的(de)(de)(de)基(ji)礎培(pei)養(yang)基(ji)培(pei)養(yang)基(ji)也就是(shi)(shi)我們(men)所說的(de)(de)(de)DMEM培(pei)養(yang)基(ji)最(zui)初是(shi)(shi)為小(xiao)鼠成(cheng)纖維細胞(bao)培(pei)養(yang)專門設計的(de)(de)(de)，現在(zai)常用(yong)(yong)于貼壁細胞(bao)的(de)(de)(de)培(pei)養(yang)。DMEM的(de)(de)(de)氨基(ji)酸濃(nong)度是(shi)(shi)MEM的(de)(de)(de)兩倍，維生素(su)濃(nong)度是(shi)(shi)MEM的(de)(de)(de)4倍，采(cai)用(yong)(yong)雙倍的(de)(de)(de)HCO3-和(he)(he)CO2濃(nong)度起到更好的(de)(de)(de)緩沖作用(yong)(yong)。最(zui)初的(de)(de)(de)配方中葡萄(tao)糖含(han)量為1000 mg/L，后來為了(le)(le)某些細胞(bao)的(de)(de)(de)生長需(xu)要，將葡萄(tao)糖含(han)量又(you)調整為4500 mg/L，這就是(shi)(shi)大家常說的(de)(de)(de)低糖和(he)(he)高糖了(le)(le)。

◆ a-MEM含有(you)附(fu)加的(de)氨基酸、維生(sheng)素以(yi)及核(he)苷和脂(zhi)肪(fang)酸，它可廣泛應用于(yu)各種細(xi)胞(bao)類型(xing)，包括對營(ying)養成分要求(qiu)苛刻的(de)細(xi)胞(bao)。

◆ Ham’s F12是為在低血清(qing)濃(nong)度(du)下克隆CHO細胞而設(she)計的(de)(de)，現在也廣(guang)泛(fan)應用于克隆形成率的(de)(de)分(fen)析及原代(dai)培(pei)(pei)(pei)養(yang)。F12還可(ke)以與DMEM 等體(ti)積混合使用，得到一種高濃(nong)度(du)與成分(fen)多樣化相結合的(de)(de)產物，這種培(pei)(pei)(pei)養(yang)基已應用于許多原代(dai)培(pei)(pei)(pei)養(yang)及更難養(yang)的(de)(de)細胞系的(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)。

◆ RPMI 1640培(pei)養(yang)基(ji)是專為淋巴細胞培(pei)養(yang)而(er)設計的，現在已廣泛應用于懸浮細胞的培(pei)養(yang)。

   很多新人經(jing)常困惑(huo)細(xi)(xi)胞該用哪一種培養基呢?其實(shi)這個(ge)問(wen)題(ti)的答案可(ke)以很簡單，也(ye)可(ke)以好復雜。如果這種細(xi)(xi)胞是(shi)購自細(xi)(xi)胞庫，那您直接問(wen)供應商(shang)就(jiu)行了，他們會(hui)給您一個很(hen)(hen)合適的(de)(de)推薦(jian)。如您不(bu)知(zhi)道(dao)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)來源，您也可(ke)以(yi)找到(dao)相(xiang)關的(de)(de)文獻(xian)，基本(ben)文獻(xian)中(zhong)使(shi)用的(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基都可(ke)作(zuo)為(wei)參(can)考(kao)。但如果你(ni)是著手建(jian)立一種(zhong)全新細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)體(ti)(ti)系，根(gen)本(ben)找不(bu)到(dao)任何參(can)考(kao)，那(nei)你(ni)就(jiu)得花點(dian)時(shi)(shi)間自己試驗。在MEM中(zhong)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)的(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，很(hen)(hen)可(ke)能在DMEM或M199中(zhong)同(tong)(tong)樣很(hen)(hen)容易生長。總(zong)之(zhi)，選MEM做(zuo)(zuo)貼壁細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)、RPMI 1640做(zuo)(zuo)懸浮細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)會(hui)是一個好的(de)(de)開始。最(zui)好同(tong)(tong)時(shi)(shi)選購(gou)幾種(zhong)不(bu)同(tong)(tong)的(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基同(tong)(tong)時(shi)(shi)進行培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)實驗來選擇其中(zhong)特別適合的(de)(de)。有時(shi)(shi)候你(ni)會(hui)驚訝(ya)地發現(xian)你(ni)的(de)(de)最(zui)佳培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)條(tiao)(tiao)件與文獻(xian)報道(dao)的(de)(de)不(bu)同(tong)(tong)，就(jiu)算是同(tong)(tong)一種(zhong)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)條(tiao)(tiao)件，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)生長狀態也時(shi)(shi)好時(shi)(shi)壞，這是很(hen)(hen)正(zheng)常的(de)(de)。因(yin)為(wei)試劑(ji)、水、不(bu)同(tong)(tong)批號的(de)(de)血清(qing)之(zhi)間都存在著差異(yi)。要提高培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基的(de)(de)穩定性(xing)，可(ke)以(yi)從培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基和血清(qing)兩方面(mian)入(ru)手。

   以前大部分實(shi)驗室(shi)都(dou)是用干粉培養基，但干粉有(you)很多弊端(duan)

   1. 配制(zhi)過程就(jiu)較為繁瑣，要溶解、調pH值，過濾，過程中可(ke)能會產生一(yi)些濃度誤(wu)差;

   2.有些實驗室的水質并不理想(xiang)，所以(yi)培養的效果(guo)會有差(cha)異。

   如(ru)果(guo)使用液體(ti)(ti)培養基(ji)，這種(zhong)人為的(de)誤差會(hui)減少，因(yin)為畢竟是大批量(liang)工(gong)業化生產的(de)，批(pi)間(jian)差會很小。

血清

   說到細(xi)胞培養(yang)，血清固(gu)然(ran)是細(xi)胞培養(yang)中不可少的成分，但血清的批間差異大，更換(huan)血(xue)(xue)清時需(xu)要(yao)做大量(liang)的(de)(de)測試以取保替換(huan)的(de)(de)血(xue)(xue)清與(yu)原來的(de)(de)相似。而血(xue)(xue)清的(de)(de)供應也(ye)(ye)是必(bi)須要(yao)考慮的(de)(de)因(yin)素。由于氣候(hou)或瘋牛病等的(de)(de)影響，血(xue)(xue)清貨源的(de)(de)問題(ti)對實驗的(de)(de)影響可(ke)非同小可(ke)。另外，血(xue)(xue)清的(de)(de)價(jia)格也(ye)(ye)很昂貴，高品質的(de)(de)澳洲(zhou)血(xue)(xue)清價(jia)格更高。因(yin)此，也(ye)(ye)有一些實驗室開始換(huan)用(yong)無血(xue)(xue)清培養(yang)基。

無血清(qing)培養基(Serum-Free Media)

   通(tong)常以SFM表(biao)示，顧名思(si)義，就是在(zai)(zai)細(xi)胞培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)中不(bu)需(xu)要(yao)(yao)添加血清(qing)(qing)(qing)，但(dan)(dan)是在(zai)(zai)某些應用中可能(neng)要(yao)(yao)添加生長(chang)因(yin)子(zi)(zi)或(huo)細(xi)胞因(yin)子(zi)(zi)。無血清(qing)(qing)(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基中添加了血清(qing)(qing)(qing)的(de)主(zhu)要(yao)(yao)成分：粘附因(yin)子(zi)(zi)、生長(chang)因(yin)子(zi)(zi)、必需(xu)的(de)營(ying)養(yang)(yang)(yang)物(wu)質(zhi)和(he)激素等，能(neng)減少上述血清(qing)(qing)(qing)帶來的(de)不(bu)利(li)因(yin)素，使細(xi)胞培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)的(de)條件更(geng)穩(wen)定。但(dan)(dan)它也不(bu)是特(te)別好的(de)，從有血清(qing)(qing)(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)過(guo)渡到無血清(qing)(qing)(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)的(de)條件并不(bu)像想象中那(nei)么直截了當。處于發(fa)育的(de)不(bu)同(tong)(tong)(tong)分化階段的(de)細(xi)胞(例如干(gan)細(xi)胞與定向(xiang)前體細(xi)胞相比(bi))需(xu)要(yao)(yao)不(bu)同(tong)(tong)(tong)的(de)配(pei)方(fang)，對(dui)生長(chang)因(yin)子(zi)(zi)和(he)細(xi)胞因(yin)子(zi)(zi)的(de)選(xuan)擇尤為重(zhong)要(yao)(yao)。而且在(zai)(zai)去(qu)除血清(qing)(qing)(qing)的(de)同(tong)(tong)(tong)時，也去(qu)除了一些血清(qing)(qing)(qing)蛋白具有的(de)保護、解(jie)毒(du)作(zuo)用，因(yin)此對(dui)試劑、水的(de)純(chun)度(du)和(he)儀器清(qing)(qing)(qing)潔度(du)的(de)要(yao)(yao)求更(geng)高。另外，它的(de)價格也比(bi)普通(tong)的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基貴(gui)很多。

細胞(bao)培養(yang)基應(ying)用選擇
    選擇培(pei)養基(ji)沒有固定(ding)的(de)標(biao)準，有幾(ji)點建(jian)議(yi)可供您參考：
（1） 建立(li)某種細胞株所用的(de)培養基(ji)應該(gai)是培養這種細胞第一個要選的(de)培養基(ji)。可以查閱參考文(wen)獻，或在購買細胞株時咨詢。
（2） 其它實(shi)驗室(shi)慣用(yong)的培(pei)(pei)養(yang)(yang)基不(bu)妨一(yi)試，許多培(pei)(pei)養(yang)(yang)基可以適合多種細胞。
（3） 根(gen)據細(xi)胞株(zhu)的特點、實驗的需要來選擇培養基。如小鼠細(xi)胞株(zhu)多選 RPMI1640。
（4） 用多種培(pei)養基(ji)培(pei)養目的細胞，觀察其生長狀態，可以用生長曲線(xian)、集落形(xing)成(cheng)率等指標判斷(duan)，根據實驗結果選擇(ze)最佳培(pei)養基(ji)，這是(shi)最客觀的方(fang)法(fa)，但比較繁瑣。

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