都知道大量提取的質(zhi)(zhi)粒DNA一(yi)般需進一(yi)步純化(hua)，常用(yong)(yong)柱(zhu)層析法(fa)和氯化(hua)銫(se)梯度(du)離心法(fa)。常使用(yong)(yong)的所(suo)有純化(hua)方法(fa)都利用(yong)(yong)了質(zhi)(zhi)粒DNA 相對較小及共價閉合環狀這樣兩個(ge)性質(zhi)(zhi)。例如，用(yong)(yong)氯化(hua)銫(se)－溴(xiu)化(hua)乙錠梯度(du)平(ping)衡(heng)離心分離質(zhi)(zhi)粒和染色體(ti)DNA 就取決于(yu)溴(xiu)化(hua)乙錠與線(xian)狀(zhuang)以(yi)及與閉環DNA分子的(de)結合(he)量(liang)有(you)(you)所不同(tong)。但是此(ci)類方法也(ye)存在了(le)一(yi)些例如使用(yong)化(hua)學物(wu)質(zhi)誘導質(zhi)粒(li)突變的(de)弊端(duan)，所以(yi)新(xin)的(de)純(chun)化(hua)方式的(de)摸索很有(you)(you)必要的(de)。

其中很好的(de)方法，也應是聚(ju)乙(yi)(yi)二醇分(fen)級沉(chen)淀法。首先我們了(le)解一(yi)下什么是聚(ju)乙(yi)(yi)二醇(PEG)，聚(ju)乙(yi)(yi)二醇是一(yi)種高分(fen)子聚(ju)合(he)物，化學式是HO(CH2CH2O)nH，無刺激性(xing)，味微苦，具有(you)良(liang)好(hao)的水溶性(xing)，并與許多(duo)有(you)機物組(zu)分有(you)良(liang)好(hao)的相(xiang)溶性(xing)。

PEG為一種非離(li)子(zi)多(duo)(duo)(duo)(duo)聚(ju)物(wu)(wu)，多(duo)(duo)(duo)(duo)離(li)子(zi)多(duo)(duo)(duo)(duo)聚(ju)物(wu)(wu)是(shi)六(liu)十(shi)年代發(fa)展起(qi)(qi)來的(de)(de)一類重要沉(chen)淀(dian)劑。基于(yu)多(duo)(duo)(duo)(duo)聚(ju)物(wu)(wu)的(de)(de)沉(chen)淀(dian)作用(yong)主要依(yi)賴于(yu)多(duo)(duo)(duo)(duo)聚(ju)物(wu)(wu)的(de)(de)濃度和被(bei)沉(chen)淀(dian)物(wu)(wu)的(de)(de)分(fen)子(zi)量(liang)大(da)小，Laurent等(deng)(1967)提出PEG的(de)(de)沉(chen)淀(dian)機理(li)主要是(shi)通過(guo)空間(jian)位置排斥，使液體中的(de)(de)微粒(li)(包括生物(wu)(wu)大(da)分(fen)子(zi)、病(bing)毒和細菌等(deng))被(bei)迫集聚(ju)在—起(qi)(qi)而引起(qi)(qi)沉(chen)淀(dian)的(de)(de)發(fa)生。PEG最(zui)早應(ying)用(yong)于提純免疫球蛋白(IgG)和沉淀一些細菌病毒，后來逐漸應(ying)用(yong)于核酸和酶的(de)分離(li)純化，特別是用(yong)PEG分離(li)質粒(li)DNA，已相當普遍(bian)。

那么(me)如何利用(yong)PEG進行質粒純化呢？

下(xia)面(mian)介紹一下(xia)PEG純化質粒的一般操作步(bu)驟：

1   向(xiang)質粒溶液中(zhong)加入等體(ti)積的(de)(de)用無菌的(de)(de)1.6M NaCl配(pei)置(zhi)的(de)(de)13% w/v PEG 8000；

2   將試(shi)管內的物質渦旋充分混勻，然(ran)后(hou)-20°C孵(fu)育(yu)1 h至過夜

3   最(zui)高轉速 4°C離心30 min；

4   輕柔吸取去上清，收(shou)集沉淀(dian)；

5   用500 μl 70% 乙醇沖洗(xi)顆(ke)粒(li)，并短暫渦旋；

6   最高轉速 25°C離心5 min，去除70% 乙醇(chun)；

7   再次離(li)心去除酒精，干(gan)燥(zao)沉(chen)淀(dian)后溶解。

該操作的優點(dian)在于：操作條件溫和，不易引起(qi)生物(wu)大(da)分(fen)子的變性。同時具有很高的沉淀效能，少量的PEG可以沉淀相當多的生物(wu)大(da)分(fen)子。