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凍(dong)存(cun)細胞一般常用胎牛血清(FBS)和二甲(jia)基亞砜(feng)(DMSO)。血清是維持細胞生存(cun)環(huan)境;DMSO是冷凍(dong)保護(hu)劑,使細胞免受低(di)溫冰(bing)晶形成、及滲透壓改變而導(dao)致的物理損傷; 細胞培(pei)養理論(lun)上(shang)基(ji)本建議的是兩種:70%培(pei)養基(ji) + 10%DMSO+ 20%胎(tai)牛血(xue)清(qing)或者(zhe)10%DMSO+ 90%胎(tai)牛血(xue)清(qing) 。 但經過有些實驗室經過對(dui)比發現:"10%的(de)DMSO,90%的(de)血清"復蘇效果相對(dui)比"70%培(pei)養(yang)基 + 10%DMSO+ 20%血清"好(hao)。 |
DMSO產品咱就不(bu)多說了,什么品牌都有(you),只(zhi)要是選擇細胞培養級別的,效果(guo)(guo)應該差(cha)不(bu)多。不(bu)過我用的是MP Biomedicals二甲基(ji)亞砜(DMSO),效果(guo)(guo)還可(ke)以。 對(dui)于胎牛血清的選擇就要相對(dui)謹慎(shen)了,市面上(shang)胎牛血清品(pin)牌可以說是魚龍(long)混雜,剛看過新聞(wen)的客戶(hu)就會知道(dao),高仿產品(pin)橫行。慎重(zhong)起見,給大家推(tui)薦CellMax品牌胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing),目前有澳(ao)洲血(xue)清(qing)(庫存緊張)和中國(guo)血(xue)源胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)可(ke)供大家試用,購(gou)買(mai)。 |
細胞凍存和復蘇需要注意哪些(xie)呢? |
1、細胞本身的狀態 一般情況下細(xi)胞的復蘇還與原代細(xi)胞的活性(xing)有(you)關,如(ru)果要(yao)凍存(cun)的細(xi)胞懸液(ye)本身活性(xing)不高的話(hua),后面復蘇的存(cun)活率也不高。 |
2、凍存細(xi)胞數(shu)量要足夠(gou) 無論你再怎么(me)小心,細胞在(zai)冷凍和復蘇的時候都是(shi)最脆弱的,總(zong)會(hui)死(si)掉一批。所(suo)以(yi),一開始就要保證凍存細胞的數量足夠。 |
3、慢凍快融 一(yi)般情(qing)況(kuang)下,細胞凍(dong)存(cun)(cun)時(shi)要遵循“慢凍(dong)快(kuai)(kuai)(kuai)融"的(de)原(yuan)則(ze)。標(biao)準的(de)降溫速(su)度(du)(du)是1-2℃/min ,當溫度(du)(du)到達-25℃,降溫速(su)度(du)(du)可(ke)(ke)加快(kuai)(kuai)(kuai)至5-10℃/min,到-80℃可(ke)(ke)直接入液(ye)氮。有些(xie)實驗室是梯(ti)度(du)(du)凍(dong)存(cun)(cun):4度(du)(du),-20,-80,液(ye)氮,依(yi)次(ci)凍(dong)存(cun)(cun)。而復蘇速(su)度(du)(du)越(yue)(yue)快(kuai)(kuai)(kuai)越(yue)(yue)好(hao)。從液(ye)氮罐里取出來之后,迅(xun)速(su)放在37°C水浴中(zhong),盡快(kuai)(kuai)(kuai)融化 |
4、注意安全(quan) 細胞凍存(cun)和(he)復(fu)蘇是細胞培養技術里面最容易出事(shi)的(de)部分。凡是和(he)液氮接觸的(de)操作,注意戴保護(hu)眼鏡和手套。注(zhu)意:復蘇的(de)(de)(de)時候,在水浴中搖搖動的(de)(de)(de)時候會有爆炸的(de)(de)(de)可(ke)能性。另外, DMSO是有毒致癌(ai)的(de)(de)(de)。接觸的(de)(de)(de)時候一(yi)務必要(yao)帶好(hao)手套。 |
5、做好標記(ji) 對于凍存細(xi)胞,一定要(yao)做好(hao)標記(ji)。如:細(xi)胞名稱、代數和凍存日期(qi)。特別是公(gong)共實(shi)驗(yan)室,更要(yao)做好(hao)標記(ji),避(bi)免找不到(dao)自己(ji)的細(xi)胞。 |
6、DMSO是否去除 由于DMSO是一種有毒致癌物質。那么,解凍(dong)之(zhi)后,應不應該去除凍存液中的(de)DMSO呢?答案(an)是no。除了極少數特別注明的(de)對(dui)DMSO敏感的(de)細(xi)(xi)胞(bao)外,99%的細(xi)(xi)胞(bao)都不需要去除DMSO。后面細(xi)(xi)胞(bao)培養中頻繁換液(ye)會慢慢去除掉(diao)DMSO。 |