處理培養細胞

從(cong) 19 世紀(ji)末開始，科學家們(men)就從(cong)各種生(sheng)物體（例如人類、小鼠(shu)、豬(zhu)、雞和(he)植物）中分離出自然環境中的細(xi)胞(bao)，并將它們(men)置于體外（拉丁語(yu)“玻璃中"）中。 ） 文化。實驗細胞是從許(xu)多不同的(de)(de)組織和器(qi)官中提取的(de)(de)，例如腸、腎、血液、腦、乳腺和許(xu)多癌(ai)癥實體。

體外培養細(xi)胞的目的是模擬培養箱(xiang)內(nei)的體內（拉丁語“活體中"）條件(jian)，或者在進行活細胞成像時甚(shen)至(zhi)在顯微鏡下模擬體內條件(jian)。每(mei)種細胞類型都需要定制(zhi)培養(yang)參數，以實(shi)現最(zui)佳(jia)的健康、活(huo)力(li)和生長。對(dui)于所有實驗，保(bao)持條件無菌、均質(zhi)和(he)可重(zhong)(zhong)復至關重(zhong)(zhong)要(yao)，以獲得可比較(jiao)的結果。

傳代、接種和冷凍細(xi)胞

為了保持(chi)細胞(bao)處(chu)于增(zeng)殖狀態(tai)，并(bing)防止它們(men)達(da)到過(guo)度匯合，以規定的時(shi)間(jian)間(jian)隔進(jin)行傳(chuan)代非常(chang)重(zhong)要。必須定期進行細(xi)胞(bao)(bao)傳(chuan)代，以保持細(xi)胞(bao)(bao)處于(yu)培(pei)養(yang)狀態、實(shi)現體積(ji)放大或在實(shi)驗開始時接種它們(men)。該過程也稱為細胞分(fen)裂或傳代培(pei)養。除其他因素外，傳代的最佳時間取決(jue)于增殖率以及所需的細胞數量。每種細胞類(lei)型(xing)的(de)(de)確(que)切裂解方案(an)都(dou)是b的(de)(de)。一般來說，貼壁細胞使(shi)用蛋白(bai)水解(jie)酶(mei)（主要(yao)是胰蛋白(bai)酶(mei)/EDTA）從基質上分離，這對(dui)于消(xiao)化其蛋白(bai)質附著鍵是必需的。接下來(lai)，將(jiang)細(xi)胞(bao)勻漿(jiang)、計數并(bing)接種到新容器中，從而將(jiang)傳代次(ci)數增加一倍。

傳代/傳代=將(jiang)細胞(bao)轉移到(dao)新鮮(xian)的培養皿和(he)生長培養基中

一些細(xi)胞系，例如 HeLa 或(huo)其他缺乏細(xi)胞周期調節的癌細(xi)胞，可以(yi)無限傳(chuan)代而不喪失分裂能力（永生細(xi)胞系）。此(ci)外，某(mou)些(xie)胚胎細胞類型或多能干(gan)細胞也是如此(ci)。其他細(xi)胞(bao)，特(te)別是(shi)原(yuan)代細(xi)胞(bao)（例(li)如，從成體器(qi)官中(zhong)分(fen)離的細(xi)胞(bao)），在幾次傳代后將失(shi)去這種能力，因為(wei)它(ta)們要(yao)么經(jing)歷衰老(lao)，要(yao)么分(fen)化(hua)，要(yao)么死亡。因此，使用具有相似(si)傳代數(shu)的細胞進行可重(zhong)復的實(shi)驗非常重(zhong)要(yao)。

對于(yu)細(xi)胞(bao)(bao)接種，需要選擇(ze)適合各(ge)自細(xi)胞(bao)(bao)類型、細(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)容器和實驗裝(zhuang)置的密度(du)。如果密(mi)度(du)太低，細胞可能會(hui)由于(yu)生長因子釋放到培養基中(zhong)不足而停止生長。缺(que)乏(fa)細胞間和細胞間基(ji)質通訊的單個細胞甚至可能因一(yi)種特殊形式的程序性細胞死亡(wang)（稱(cheng)為失巢(chao)凋亡(wang)）而死亡(wang)。如(ru)果(guo)接種密度(du)太高，細胞可(ke)能在(zai)很短的時間內(nei)就(jiu)已(yi)經(jing)達(da)到過(guo)度(du)匯(hui)合。這會導致增殖受損和(he)細胞與基(ji)質分離，從(cong)而導致實驗(yan)條件不(bu)可重(zhong)復。

標準細胞類型可在 –80°C 下(xia)短期(qi)保存，或在液氮(dan)中長期(qi)保存。為(wei)此，需要對細(xi)胞(bao)進(jin)行胰蛋白酶(mei)化、均質化和離心，然后(hou)使用特殊的(de)冷凍介質進(jin)行冷凍。為了對抗(kang)此過程引(yin)起的細胞應(ying)激，建議使用具有(you)高回收率(lv)的冷凍介質。此外(wai)，解凍過程(cheng)必須(xu)快速進行（例如，在37°C的水浴中），然后(hou)將細胞轉(zhuan)移到培養(yang)基中并將其放入培養(yang)箱中以創造生理條件。