一、如(ru)何選(xuan)用(yong)培養基(ji)?   選(xuan)擇培養基(ji)沒有一定標(biao)準(zhun)，有幾點建(jian)議可(ke)供參考(kao)：

1. 建立某種細(xi)胞(bao)株(zhu)所用的培養(yang)基應該是培養(yang)這種細(xi)胞(bao)第一個選的培養(yang)基。可以查(cha)閱文獻，或在購(gou)買細(xi)胞(bao)株(zhu)時(shi)咨詢(xun)。

2. 根據(ju)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)株的特點、實(shi)驗的需要來選擇培養基。如小鼠細(xi)(xi)胞(bao)(bao)株多選1640；進行細(xi)(xi)胞(bao)(bao)雜交、基因轉移實(shi)驗，可選擇IMDM。

3. 用多種培(pei)養基(ji)培(pei)養目的細胞，觀(guan)察(cha)其生長狀態，可以用生長曲線(xian)、集落形成率(lv)等指(zhi)標判斷(duan)，根據實(shi)驗(yan)結果選擇最佳培(pei)養基(ji)，這是最客觀(guan)的方法(fa)，但比較(jiao)繁瑣(suo)。

4.ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集了絕大多數細胞的(de)(de)(de)(de)詳(xiang)細資(zi)料。打開ATCC網頁(ye)的(de)(de)(de)(de)Cells and hybridomas鏈接，輸入細胞名稱就可(ke)以搜索ATCC的(de)(de)(de)(de)細胞數據庫。數據庫中有每一種細胞的(de)(de)(de)(de)詳(xiang)細描述，包括細胞的(de)(de)(de)(de)來源(yuan)，培養和凍(dong)存(cun)條件，以及相關文獻等資(zi)料。

二(er)、液(ye)體培養基(ji)可以放(fang)-20℃保存嗎？

不可以！因為(wei)在-20℃下，培養基中的(de)鹽(yan)容(rong)易(yi)析出，培養基融化后，有(you)的(de)鹽(yan)可能(neng)無(wu)法重新溶解，從而導致培養基滲透壓(ya)降低(di)，培養細胞時，細胞容(rong)易(yi)破裂而死(si)亡(wang)。   

三、新(xin)配制的液體培養基(ji)能保存(cun)多久？

我(wo)們建議將新配(pei)制的培(pei)養基(ji)放置(zhi)于4℃，避光(guang)保存盡量在一周內(nei)使用完(wan)畢。培(pei)養基(ji)越(yue)新鮮(xian)越(yue)好(hao)。

四、培養(yang)基中添加了(le)血(xue)清和(he)抗生素后，可長期保(bao)存嗎？

一(yi)旦(dan)您(nin)在(zai)(zai)(zai)新鮮培養基(ji)中(zhong)添加(jia)了(le)血清(qing)和抗生(sheng)素時，您(nin)應該(gai)在(zai)(zai)(zai)兩到三周(zhou)內使用它。因為(wei)一(yi)些抗生(sheng)素和血清(qing)中(zhong)的基(ji)本成分在(zai)(zai)(zai)解凍(dong)后就開始降解。

五、培養基(ji)中是否須添加抗生(sheng)素？

除了特殊篩選系統外，一般正常培養狀態下(xia)，培養基中不應添加任何抗(kang)生素。

為(wei)防止細菌、真菌污染，可以加入青(qing)霉素-鏈霉素雙抗溶液，其培養基中(zhong)的終濃度(du)為(wei)青(qing)霉素100U/ml，鏈霉素為(wei)100ug/ml。   

六、為何培養基保存于(yu)4℃冰(bing)箱中，顏色會偏(pian)暗(an)紅色，且pH值越(yue)來越(yue)偏(pian)堿性？

培養基保存(cun)于4℃冰箱中， 培養基內(nei)之CO₂ 會逐漸溢出，造成培養基越來越偏堿性。而培養基中之酸堿指示劑（通常為phenol red）的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿之結果， 將造成細胞生長停滯或死亡。若培養基偏堿時， 可以通入無菌過濾之CO₂， 以調整pH 值。

七、培養液pH是(shi)怎樣影響細胞生長(chang)的？

由于(yu)(yu)大多數細(xi)胞(bao)(bao)適宜PH值(zhi)(zhi)為(wei)7.2-7.4，偏(pian)離此(ci)(ci)范(fan)圍對細(xi)胞(bao)(bao)將產生(sheng)有(you)害的影(ying)響(xiang)。各種細(xi)胞(bao)(bao)對PH值(zhi)(zhi)要(yao)求也不全部相同，原代細(xi)胞(bao)(bao)培養一般對PH值(zhi)(zhi)變(bian)動耐(nai)受(shou)差，無限細(xi)胞(bao)(bao)系耐(nai)受(shou)力強。 但總體(ti)來(lai)說(shuo)，細(xi)胞(bao)(bao)耐(nai)酸性比(bi)耐(nai)堿性強一些(xie)，偏(pian)酸環境中更有(you)利于(yu)(yu)細(xi)胞(bao)(bao)的生(sheng)長。因此(ci)(ci)，配制(zhi)培養用液(ye)時(shi)可(ke)把液(ye)體(ti)的PH值(zhi)(zhi)稍微(wei)(wei)調的偏(pian)酸一些(xie)。液(ye)體(ti)在(zai)經過(guo)(guo)0.1um或(huo)0.2um濾膜過(guo)(guo)濾時(shi)，PH值(zhi)(zhi)會向上(shang)浮(fu)動0.2左右。

八(ba)、為什么液體培養基1640顏色(se)發(fa)黃，是pH值不(bu)對嗎(ma)？

不是。因為(wei)配方(fang)原(yuan)因，1640為(wei)堿酚紅型，其中(zhong)酚紅的濃(nong)度只有DMEM的四分之一，所以是因為(wei)酚紅濃(nong)度低(di)，而非(fei)PH值低(di)。

九、為什么有客戶要求培養基中不含(han)酚紅？

研(yan)(yan)究(jiu)表明，酚(fen)紅(hong)可以模擬固(gu)醇類激素的作用(yong)（特別(bie)是(shi)雌(ci)激素）。為避免固(gu)醇類反應，細胞(bao)培(pei)(pei)(pei)養(yang)，尤其是(shi)哺(bu)乳(ru)類細胞(bao)時，用(yong)不加酚(fen)紅(hong)的培(pei)(pei)(pei)養(yang)基。由于酚(fen)紅(hong)干擾檢(jian)測(ce)，一(yi)些研(yan)(yan)究(jiu)人(ren)員(yuan)在做流式細胞(bao)檢(jian)測(ce)時，不使用(yong)加酚(fen)紅(hong)的培(pei)(pei)(pei)養(yang)基。

十、放置在冰箱中的培養(yang)基顏(yan)色會發(fa)生變化，為什(shen)么？

培養基保存于4℃冰箱中，培養基內CO₂會逐漸溢(yi)出，造成培養(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)越(yue)來越(yue)偏堿(jian)性。而培養(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)中酸堿(jian)指示劑（通常為(wei)phenol red）的顏色也會隨(sui)堿(jian)性增加(jia)而更偏暗紅。培養(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)偏堿(jian)后再用(yong)于細(xi)胞培養(yang)將(jiang)造成細(xi)胞生長停滯(zhi)或死(si)亡。培養(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)偏堿(jian)時，可(ke)以通入無(wu)菌過濾的CO₂，以調整pH值。

十一、無血(xue)清(qing)培養與有血(xue)清(qing)培養使(shi)用的(de)抗生素量一樣(yang)嗎？

當在(zai)無(wu)血(xue)(xue)(xue)清(qing)培養(yang)基中(zhong)(zhong)添加抗(kang)生素(su)時，降低至(zhi)少在(zai)有血(xue)(xue)(xue)清(qing)培養(yang)基中(zhong)(zhong)所使用濃(nong)度(du)的50%。因為血(xue)(xue)(xue)清(qing)中(zhong)(zhong)的蛋白會結(jie)合和滅活一些抗(kang)生素(su)。而在(zai)無(wu)血(xue)(xue)(xue)清(qing)培養(yang)條件下，抗(kang)生素(su)不被滅活。

十二、培養基各(ge)個成(cheng)分的作用有哪些？

1.NaHCO₃的作用是什么(me)？

與(yu)二氧化碳一起(qi)形成緩沖系統，保持培養基PH值穩定。

2.丙(bing)酮酸(suan)鈉(na)的作用是什(shen)么？

丙(bing)酮酸鈉可(ke)以作為(wei)細(xi)(xi)胞(bao)培養(yang)中的替代碳源，盡(jin)管細(xi)(xi)胞(bao)更(geng)傾向(xiang)于(yu)以葡萄(tao)糖作為(wei)碳源，但是如果沒有葡萄(tao)糖的話，細(xi)(xi)胞(bao)也可(ke)以代謝丙(bing)酮酸鈉。丙(bing)酮酸鈉的貯存液濃(nong)度(du)一般為(wei)50mM，-20℃保(bao)存，培養(yang)基中的終濃(nong)度(du)為(wei)1mM.

3.加入(ru)HEPES有(you)何好處(chu)？

培(pei)養(yang)基(ji)(ji)中經(jing)常(chang)用的(de)Buffer system是碳酸氫鹽，它可(ke)提(ti)供營養(yang)，但卻在生理PH值條件下(xia)會降低緩沖能力。而HEPES是一種很(hen)強的(de)Buffer，加(jia)入HEPES能使(shi)細胞培(pei)養(yang)基(ji)(ji)在PH7.2-7.6條件下(xia)緩沖能力增強。HEPES的(de)貯存液(ye)濃(nong)度(du)一般為(wei)1M，常(chang)溫保存。培(pei)養(yang)基(ji)(ji)中的(de)終濃(nong)度(du)為(wei)25mM，即5ml 1M的(de)HEPES加(jia)入到200ml全部培(pei)養(yang)基(ji)(ji)中。

4.酚紅的作(zuo)用是什么？

酚(fen)紅在培養(yang)基(ji)中被用(yong)來(lai)作為PH值(zhi)指示劑(ji)：中性時為紅色(se)，酸性時為黃色(se)，堿性時為紫色(se)。

5.谷氨(an)酰(xian)胺的作用是什么？

幾(ji)乎所(suo)(suo)有的(de)(de)細胞對谷氨酰(xian)胺(an)都(dou)有較(jiao)高的(de)(de)要(yao)求。谷氨酰(xian)胺(an)脫掉氨基(ji)后，可作(zuo)為培(pei)(pei)養(yang)細胞的(de)(de)能量(liang)來源(yuan)，參與蛋白質的(de)(de)合成和(he)能量(liang)代謝。在缺少谷氨酰(xian)胺(an)時，細胞生長不良(liang)而(er)死亡(wang)。所(suo)(suo)以(yi)，各種培(pei)(pei)養(yang)液中都(dou)含有較(jiao)大量(liang)的(de)(de)谷氨酰(xian)胺(an)。

谷氨酰胺在溶液(ye)中很不穩定(ding)，應置-20℃冰(bing)凍保存(cun)，用前加入(ru)培(pei)養基中。加有(you)谷氨酰胺的液(ye)體培(pei)養基4度冰(bing)箱儲存(cun)兩(liang)周以上時，應重新加入(ru)原(yuan)來量(liang)的谷氨酰胺。

試(shi)驗操作中常配制(zhi)高濃(nong)度（100倍(bei)）的谷氨(an)酰胺溶液（1ml/支(zhi)），分裝使用，-20℃保存。使用時，每支(zhi)1ml的谷氨(an)酰胺加入到(dao)99ml全部培(pei)養基中，使其(qi)終(zhong)濃(nong)度為(wei)2mM培(pei)養基。