1.怎樣查到一個(ge)特定(ding)細胞株的相關(guan)知(zhi)識(shi)和培養(yang)條(tiao)件？                                               

ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數(shu)(shu)細(xi)胞(bao)的(de)詳細(xi)資料。打(da)開ATCC網頁的(de)Cells and hybridomas鏈接，輸(shu)入細(xi)胞(bao)名稱就(jiu)可以(yi)搜(sou)索ATCC的(de)細(xi)胞(bao)數(shu)(shu)據庫。數(shu)(shu)據庫中有每一種細(xi)胞(bao)的(de)詳細(xi)描述，包括(kuo)細(xi)胞(bao)的(de)來源，培養和凍存條件，以(yi)及相關

文獻等資料。                                                                               ;                      

2.如何選用特殊(shu)細胞系培養基？                             ;                                            

培(pei)(pei)養某類型細胞沒有固定(ding)的培(pei)(pei)養條件(jian)。MEM中(zhong)培(pei)(pei)養的細胞，很可能(neng)在DMEM或M199

中同樣容易生長。總之，MEM、DMEM做貼壁細胞(bao)培養(yang)；RPMI1640做懸浮細胞(bao)

培(pei)養(yang)；各種目(mu)的無血清培(pei)養(yang)AIMV培(pei)養(yang)基SFM。新的細胞培(pei)養(yang)時要(yao)詳查資料         

3.自己新配制的液體培養(yang)基(ji)能保存多久？         ;                                                    

我們建議將新(xin)(xin)配制的培(pei)養基(ji)放置于4℃，避光保存盡量在一周內(nei)使用(yong)完畢。培(pei)養基(ji)越新(xin)(xin)

鮮越好。                                                                                                         

4.培養(yang)基中添加了血清(qing)和抗生素后，可(ke)長期保存嗎？                                             

一旦您在(zai)新鮮培養基中(zhong)添加了血清和(he)抗(kang)生(sheng)素時，您應該在(zai)一到(dao)兩(liang)周內使用它。因為一些

抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。                                                  

5.培養基中是否須添加抗生素？                                                                         

除了特殊(shu)篩選系(xi)統(tong)外，一般正常(chang)培養狀(zhuang)態下，培養基中(zhong)不應添加(jia)任(ren)何抗生素。           

為防止細菌、真菌污(wu)染(ran)，可(ke)以加入(ru)青(qing)霉(mei)素(su)-鏈霉(mei)素(su)雙抗(kang)溶液，其培養基中的終濃度為青(qing)霉(mei)

素100U/ml，鏈霉素為(wei)100ug/ml。                                                                     

6.液(ye)體培養基可以放-20℃保存嗎？                                                                     

不可以！因為在-20℃下，培(pei)養基(ji)中(zhong)的(de)鹽容易析出(chu)，培(pei)養基(ji)融化后，有的(de)鹽可能無法重

新溶解，從而(er)導致培養基(ji)滲(shen)透壓降低，培養細胞(bao)時，細胞(bao)容易破(po)裂而(er)死亡。               

7.為(wei)何培養(yang)基(ji)保存于4℃冰箱中，顏色會(hui)偏(pian)(pian)暗紅色，且pH值越(yue)來(lai)越(yue)偏(pian)(pian)堿性？             

培養基保存于4℃冰箱中， 培養基內之CO₂ 會逐漸溢出，造成培養基越來越偏堿性。而

培(pei)養(yang)基(ji)中之(zhi)酸(suan)堿(jian)指示劑(ji)(通(tong)常為(wei)phenol red) 的顏色也會隨堿(jian)性增加而更(geng)偏暗(an)紅。培(pei)養(yang)基(ji)

偏堿之結果，將造成細胞生長停滯或死亡。培養基偏堿時，可以通入無菌過濾之CO₂，

以調整pH 值。                                               ;                                                  

8.為什(shen)么你公司液(ye)體培(pei)養基1640顏色發黃，是pH值不(bu)對(dui)嗎？                                   

不是(shi)。因為(wei)配(pei)方(fang)原(yuan)因，1640為(wei)堿(jian)酚紅型，其中酚紅的(de)(de)濃(nong)度只有DMEM的(de)(de)四(si)分之一，所

以是因為(wei)酚紅濃度低，而非PH值低。                                                                   

9.培養液pH是怎樣影響細胞生長的？                                                                   

由于大多數(shu)細(xi)(xi)胞適宜PH值為(wei)7.2-7.4，偏離此范圍(wei)對細(xi)(xi)胞將產生有害(hai)的影響(xiang)。各(ge)種細(xi)(xi)胞

對PH值(zhi)要求(qiu)也不相同，原代細(xi)胞(bao)培養一般對PH值(zhi)變動耐(nai)(nai)受差，無限細(xi)胞(bao)系耐(nai)(nai)受力強。 總體來(lai)說，細(xi)胞(bao)耐(nai)(nai)酸性比耐(nai)(nai)堿性強一些，偏酸環境中更有利于細(xi)胞(bao)的生(sheng)長。因此，

配(pei)制(zhi)培(pei)養用(yong)液(ye)時可把液(ye)體(ti)的PH值稍微調的偏酸(suan)一些。液(ye)體(ti)在經過(guo)0.1um或0.2um濾膜(mo)過(guo)

濾時，PH值會向上浮動0.2左右。                                                                         

10.培養液滲透壓是怎樣影響細胞生長的？                                                             

當細胞內、外環境的分子濃度不同時就會產生滲透壓。這種情況下，水分通過滲透流入或流出細胞，從而改變細胞的內環境。高滲透壓迫使水分從細胞中擴散出來導致細胞收縮，這種情況會使DNA和蛋白遭到破壞，細胞周期停滯以及最終使細胞死亡；反之，低滲透壓使水分流入細胞內，使細胞腫脹破裂。                                                                     

11.為什么有客戶要求培養基中不含酚紅？                                                             

研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）。為避免固醇類反應，細胞培養，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加酚紅的培養基。                                                           

12.酚紅的作用是什么？                                                                                       

酚紅在(zai)培養基中被用(yong)來作為(wei)PH值指示劑：中性時(shi)(shi)為(wei)紅色(se)(se)，酸(suan)性時(shi)(shi)為(wei)黃色(se)(se)，堿性時(shi)(shi)為(wei)紫色(se)(se)。

13.你公司干粉培養基里含NaHCO₃嗎？                       ;                                          

所有的干粉培養基中都不含NaHCO₃ 。請依據說明書或包裝袋上的標注，在干粉培養基

溶解后添加NaHCO₃ 。                                                                                 

14.NaHCO₃的作用是什么？                                                                                 與(yu)CO2一(yi)起形成緩沖系統，保持培養基PH值穩定。                                                         

15.我們實驗室培養箱CO₂濃度一直以來都是5%，這樣可以嗎？                               

當然不可以，不同的培養基要求添加NaHCO₃的量不一樣，如DMEM要求添加3.7g/L，

為了保持PH值穩定，必須用高濃度的CO₂平衡，一般不低于8%，而1640等要求添加NaHCO₃ 2.2g/L，還有些培養基要求添加更少，那么這些培養基就要求較低的濃度平

衡，一般是5%。                                                   ;                                          

16.培養基中丙酮酸鈉的作用是什么？                                                           ;        

丙酮酸鈉可以作為(wei)細胞培(pei)養中(zhong)的替(ti)代(dai)碳源，盡管細胞更傾(qing)向于以葡萄糖作為(wei)碳源，但是

   如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。                                                   

丙酮酸(suan)鈉(na)的貯存(cun)液濃度(du)一般為50mM，-20℃保存(cun)，培養基中的終濃度(du)為1mM。         

17.谷氨酰胺的作用是什么？                                                             ;                  

幾乎所有的細胞對谷氨酰(xian)胺(an)都(dou)有較高的要求。谷氨酰(xian)胺(an)脫(tuo)掉氨基(ji)后，可作為(wei)培養(yang)細胞的

能量(liang)來源，參與蛋白質(zhi)的合成(cheng)和能量(liang)代謝。在缺少(shao)谷氨酰(xian)胺時，細胞生長不良(liang)而(er)死亡。

所以，各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。                                                    

谷氨酰胺在溶(rong)液(ye)中很(hen)不穩定，應置-20℃冰凍保存，用前加入(ru)培養(yang)基中。加有谷氨酰胺

的液體培養(yang)基4度冰箱儲存兩周以上(shang)時，應重新加入原(yuan)來量的谷氨酰胺。                   

18.在培養基中加入HEPES有何好處？                                                                   

培養基中的Buffer system是碳酸氫鹽，它可提供營養，但卻在生理PH值條件下會降低緩沖能力。而HEPES是一種很強的Buffer，加入HEPES能使細胞培養基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強。                                                                                         

Hepes的貯存液濃度一般為1M，常溫保存。培養基中的終濃度為25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml培養基中。                                                                     

19.GlutaMAX-Ⅰ是什么？培養細胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ？這個二肽有多穩定？     

GlutaMAX-Ⅰ是一個(ge)L-谷氨酰胺的衍生物(wu)，其不穩定的a-氨基用L-丙氨酸來(lai)保護。一種

肽(tai)(tai)酶逐(zhu)漸裂解二肽(tai)(tai)，釋放L-谷氨酰(xian)胺供(gong)利用。                                                         

GlutaMAX-Ⅰ二(er)肽非(fei)常(chang)穩定，即使(shi)在121℃滅菌(jun)20min， GlutaMAX-Ⅰ二(er)肽溶液有最(zui)

小的降解；而在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎降解。                                         

L-谷氨酰胺在細(xi)胞培養時是重要的，但其在溶液中不(bu)穩定，經過一段時間后會降解(jie)，確

切的(de)降解率一直沒有最終確定。L-谷氨酰胺的(de)降解導(dao)致氨的(de)形成，而氨對于一些細胞具(ju)

有毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是細胞培養中谷氨酰胺的替代品。                                 

20.可否使用與原先培養條件不同的培養基？                                                         

不(bu)能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培(pei)養基，若驟(zou)然(ran)使用和(he)原先提供(gong)之培(pei)

養條件不同的培養基，細胞大多無法立即適應，造成細胞無法存活。