Q: 什么是特(te)定的抗(kang)體？

抗體（Ab），也被稱為免(mian)疫(yi)球蛋白（Ig），是一種Y型的蛋白質，通過Fab區(qu)域(yu)的可變區(qu)域(yu)來中和病原體，例如致病性細菌和病毒。

Q: 如何選擇(ze)適合我(wo)的實驗的正確抗體(ti)？CUSABIO是否提供(gong)具有多種(zhong)應用的抗體(ti)？

您(nin)在(zai)(zai)選(xuan)擇抗(kang)體時需(xu)要注意以(yi)(yi)下幾個方(fang)(fang)面：樣本的(de)物(wu)種、抗(kang)體的(de)宿主物(wu)種、抗(kang)體的(de)標(biao)(biao)記方(fang)(fang)式以(yi)(yi)及適用(yong)(yong)于(yu)您(nin)實驗的(de)推薦稀釋比例(li)。CUSABIO保證其抗(kang)體適用(yong)(yong)于(yu)標(biao)(biao)注在(zai)(zai)網(wang)站(zhan)或產品數(shu)據表上的(de)應用(yong)(yong)和物(wu)種。如果您(nin)使用(yong)(yong)的(de)應用(yong)(yong)我(wo)們沒有測試(shi)過，我(wo)們將(jiang)為您(nin)提供(gong)試(shi)用(yong)(yong)樣品，在(zai)(zai)購(gou)買(mai)正裝之前進行評估。

Q: 單克隆(long)抗(kang)體和多克隆(long)抗(kang)體有(you)什么區別(bie)？

單克(ke)隆抗(kang)(kang)(kang)體(ti)是使用相(xiang)同(tong)的(de)克(ke)隆免(mian)疫細(xi)(xi)胞(bao)(bao)制備而(er)成，它(ta)們(men)(men)都(dou)是來(lai)自一(yi)個(ge)特定的(de)母細(xi)(xi)胞(bao)(bao)的(de)克(ke)隆。因(yin)此，它(ta)們(men)(men)對(dui)同(tong)一(yi)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)和表位(wei)具(ju)有親和力。多(duo)(duo)(duo)克(ke)隆抗(kang)(kang)(kang)體(ti)是使用多(duo)(duo)(duo)個(ge)不同(tong)的(de)免(mian)疫細(xi)(xi)胞(bao)(bao)制備而(er)成，它(ta)們(men)(men)對(dui)同(tong)一(yi)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)具(ju)有親和力，但結(jie)合(he)的(de)表位(wei)不同(tong)。單克(ke)隆抗(kang)(kang)(kang)體(ti)只結(jie)合(he)一(yi)個(ge)表位(wei)，而(er)多(duo)(duo)(duo)克(ke)隆抗(kang)(kang)(kang)體(ti)則結(jie)合(he)同(tong)一(yi)蛋白質上的(de)不同(tong)表位(wei)。單克(ke)隆抗(kang)(kang)(kang)體(ti)比多(duo)(duo)(duo)克(ke)隆抗(kang)(kang)(kang)體(ti)更加特異且(qie)背景噪音(yin)更少(shao)，因(yin)此在生化(hua)分析中(zhong)通(tong)常(chang)更可取。然而(er)，單克(ke)隆抗(kang)(kang)(kang)體(ti)的(de)生產成本通(tong)常(chang)更高，適應性較差，并且(qie)對(dui)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)的(de)微小變化(hua)非常(chang)敏感。

Q: 一抗和二(er)抗之間(jian)有什(shen)么關系？如何選(xuan)擇適(shi)合我實驗的正確二(er)抗？

一(yi)般情況下(xia)，一(yi)抗用(yong)于捕獲目(mu)標蛋白，二抗能夠與(yu)一(yi)抗結合(he)，并且標記有可以放大檢(jian)測信號的酶(mei)或(huo)染料。我們建議(yi)您(nin)考(kao)慮(lv)以下(xia)幾(ji)個因素：

a. 根據宿(su)主物種選(xuan)擇。例如(ru)，如(ru)果一抗(kang)(kang)來自小(xiao)鼠，那(nei)么(me)二抗(kang)(kang)應該(gai)是抗(kang)(kang)小(xiao)鼠的。

b. 根(gen)據一抗的特性選擇。

c. 根據您的實驗應(ying)用，例如WB、IHC、ELISA等。

Q: 您能告(gao)訴我每(mei)個抗體結(jie)合多少個生(sheng)物素嗎？

生(sheng)物素與(yu)抗(kang)體的(de)摩爾比為36.6:1。然而，很難準確(que)說出每個抗(kang)體結(jie)(jie)(jie)合了(le)多(duo)少個生(sheng)物素，因為標記是通(tong)過賴氨(an)酸(suan)殘基進行(xing)的(de)，并不清楚(chu)有(you)多(duo)少個原始氨(an)基團與(yu)生(sheng)物素結(jie)(jie)(jie)合。平(ping)均(jun)而言(yan)，每個IgG分子可以結(jie)(jie)(jie)合3—5個生(sheng)物素分子。

Q: 為什么(me)實際帶狀物的分子量(liang)大于理論(lun)分子量(liang)？

您可以使(shi)用CUSABIO的(de)(de)分子(zi)量(liang)計(ji)算(suan)(suan)器(qi)計(ji)算(suan)(suan)抗體的(de)(de)分子(zi)量(liang)。如(ru)(ru)果(guo)測(ce)試結果(guo)與理論分子(zi)量(liang)之(zhi)間有(you)很大差異，可能的(de)(de)原因包括：目標蛋白存在多個(ge)修飾(shi)位點(dian)，例如(ru)(ru)糖(tang)基化，或(huo)者與其(qi)他(ta)蛋白質形成(cheng)穩定的(de)(de)復合物，或(huo)者被切(qie)割或(huo)降(jiang)解。

Q：為(wei)什么我收到的抗體容量少于標(biao)簽上所標(biao)示的容量？

在(zai)運輸(shu)和(he)儲存過程中，少量(liang)的(de)抗體(ti)可能(neng)會附(fu)著在(zai)產品瓶(ping)蓋的(de)密封(feng)處。如(ru)果需要(yao)，可以在(zai)臺式離心機上對瓶(ping)子進行短(duan)暫離心，以使容器蓋中的(de)液體(ti)脫離。

Q: 您能為(wei)該抗體推薦(jian)同(tong)型對(dui)照(zhao)嗎？

同(tong)型(xing)(xing)對(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)用于(yu)確認一(yi)(yi)抗(kang)結合的特(te)(te)異性(xing)，以排除非特(te)(te)異性(xing)Fc受體(ti)結合或其他蛋(dan)白質相(xiang)互作用的影響。同(tong)型(xing)(xing)對(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)抗(kang)體(ti)應與一(yi)(yi)抗(kang)的宿(su)主物種、同(tong)型(xing)(xing)和標記方式(shi)相(xiang)匹配。例(li)如，如果(guo)一(yi)(yi)抗(kang)是FITC標記的小鼠(shu)IgG1，那(nei)么您需要(yao)選擇(ze)一(yi)(yi)款FITC標記的小鼠(shu)IgG1同(tong)型(xing)(xing)對(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)。大多數同(tong)型(xing)(xing)對(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)抗(kang)體(ti)是單克隆抗(kang)體(ti)，多克隆抗(kang)體(ti)不適用，因為(wei)多克隆抗(kang)體(ti)含有多個IgG亞類(lei)。

Q: 用哪種緩沖液來儲存抗體(ti)？

我(wo)們使用(yong)0.01M PBS緩沖液（pH 7.4）加入50%甘油。

Q: 您(nin)可以提供哪種類型(xing)的抗體標(biao)記(ji)？

我們目(mu)前(qian)提供FITC、HRP、生(sheng)物素(su)等隨機標記(ji)在(zai)游離的(de)賴(lai)氨(an)酸（Lys）氨(an)基上的(de)標記(ji)。

Q: 為什么有(you)些抗體不(bu)再提供？

我們(men)從庫(ku)存(cun)中(zhong)剔除這些抗體，是因為我們(men)有新的產(chan)品替代它們(men)。

Q: 為什么在免疫(yi)印跡（Western Blot）中沒有帶狀(zhuang)物？

可能存在的原因有：

a. 抗體不足。一些抗體可能(neng)與目標蛋白(bai)的(de)親和(he)性(xing)較(jiao)差(cha)。您(nin)應(ying)該減少抗體的(de)稀(xi)釋倍數（比(bi)推薦的(de)起(qi)始稀(xi)釋度低(di)2-4倍）。同時，抗體可能(neng)已(yi)失去(qu)活性(xing)，您(nin)應(ying)該進(jin)行(xing)點印跡（Dot Blot）實驗。

b. 蛋(dan)白(bai)質(zhi)不足(zu)。您應該提高在凝膠(jiao)上(shang)加(jia)載的總蛋(dan)白(bai)質(zhi)量。通過其(qi)他方法確(que)認(ren)蛋(dan)白(bai)質(zhi)的存在。使用陽性對(dui)照（重(zhong)組蛋(dan)白(bai)、細(xi)胞(bao)系或處理細(xi)胞(bao)以表達感興(xing)趣(qu)的分析物）。進(jin)行(xing)點印跡(ji)實驗。

c. 轉(zhuan)膜(mo)(mo)不良。您應該用甲醇濕潤(run)PVDF/Immobilon-P膜(mo)(mo)，或者(zhe)用轉(zhuan)膜(mo)(mo)緩(huan)沖液濕潤(run)硝酸纖(xian)維膜(mo)(mo)，以(yi)確保(bao)PVDF膜(mo)(mo)與凝膠之間有(you)良好接觸。

d. 轉膜不(bu)全部(bu)。您(nin)應該延長轉膜時(shi)間，因為一些分子量較大的蛋白質可能需要更長的轉膜時(shi)間。

e. 過度轉膜。對于(yu)分(fen)子量(liang)較小（低于(yu)10 kDa）的蛋(dan)白質，您應該減少轉膜電壓(ya)或時間。

f. 等電點大(da)于9。您應(ying)該使(shi)用更(geng)高pH值的替代緩沖(chong)體系，如CAPS（pH 10.5）。

g. 使(shi)用(yong)了錯誤(wu)的(de)二抗(kang)(kang)。您應該確(que)認(ren)一抗(kang)(kang)的(de)宿主物(wu)種和抗(kang)(kang)體類型，以選擇正確(que)的(de)二抗(kang)(kang)。

h. 抗體(ti)無(wu)效。不要使用過期的抗體(ti)。

i. 存在(zai)偶(ou)氮(dan)二(er)碘(dian)(dian)苯酚(fen)（Sodium azide）污(wu)染。確(que)保緩(huan)沖(chong)液不含偶(ou)氮(dan)二(er)碘(dian)(dian)苯酚(fen)，因為它可能熄滅(mie)HRP信號(hao)。

j. 一抗的孵育時間不足。您應該延長(chang)一抗的孵育時間，最好過夜孵育在4℃。

Q: 在免疫印跡（Western Blot）中為什么信號弱？

可能存在的原因有：

a. 蛋白(bai)質與抗(kang)(kang)體(ti)結合較弱。您應(ying)該盡量減少洗(xi)滌次數。減少抗(kang)(kang)體(ti)溶液(ye)中(zhong)的(de)NaCl濃度，或(huo)者(zhe)在(zai)洗(xi)滌步(bu)驟中(zhong)使(shi)用印跡緩沖液(ye)（推薦(jian)范(fan)圍為(wei)0.15 M-0.5 M）。

b. 抗(kang)體不足。您應該將(jiang)抗(kang)體濃度(du)增加到比推薦(jian)的起始(shi)濃度(du)高2-4倍。

c. 蛋白(bai)質不足。您應(ying)該提高在凝(ning)膠上加載的總蛋白(bai)質量。

d. 反應偶(ou)聯不活性。您應該(gai)在管(guan)中混合酶和(he)底物。如果顏色(se)不顯(xian)現或者(zhe)顏色(se)較弱，可以制備新(xin)的試劑(ji)或購買新(xin)的試劑(ji)。嘗試使用(yong)ECL。

e. ECL試劑過弱/過舊。您應該購(gou)買新的ECL試劑。

f. 脫脂(zhi)奶(nai)可能掩(yan)蓋了某些抗原。您(nin)應該減少阻斷液(ye)中(zhong)脫脂(zhi)奶(nai)的百分比，或者用3%牛血清白蛋(dan)白（BSA）代替。

點擊下方鏈接(jie)可查看不同原因對(dui)應(ying)的解(jie)決方案

Q: 為什么在免(mian)疫印跡（Western Blot）中出現額外(wai)的帶狀物？

可能存在的原因有：

a. 主抗(kang)體的(de)(de)非特異性結合(he)。您(nin)應(ying)該增加主抗(kang)體的(de)(de)稀釋倍數。減(jian)少(shao)在(zai)凝(ning)膠上(shang)加載的(de)(de)總蛋白(bai)質量。使用單克隆(long)抗(kang)體或抗(kang)原親和純(chun)化的(de)(de)抗(kang)體。

b. 二抗(kang)(kang)的(de)(de)非特異性(xing)結(jie)合。您應該進行一個只用二抗(kang)(kang)的(de)(de)對照試(shi)驗（不加主抗(kang)(kang)體）。如果出現條帶(dai)，則選擇其他二抗(kang)(kang)，使用單(dan)克隆(long)抗(kang)(kang)體或抗(kang)(kang)原(yuan)親和純化的(de)(de)抗(kang)(kang)體。

c. 分(fen)析物的降解。您應(ying)該盡量減少樣(yang)品(pin)(pin)的凍融循環，存儲前向樣(yang)品(pin)(pin)中添加蛋白酶抑(yi)制劑(ji)，或制備新(xin)鮮樣(yang)品(pin)(pin)。

d. 分(fen)析物的(de)聚集。您應該增(zeng)加(jia)DTT的(de)用量(liang)以確(que)保(bao)還原(yuan)二硫鍵（20-100 mM DTT）。在加(jia)載凝膠前，將樣品置于(yu)沸(fei)(fei)水中煮沸(fei)(fei)5—10分(fen)鐘(zhong)。進行(xing)短時間的(de)離心。

e. 試(shi)劑的污染。您(nin)應(ying)該檢查緩(huan)沖液是否被污染，或者嘗試(shi)制(zhi)備新鮮的試(shi)劑。

Q: 在免疫印跡（Western Blot）中(zhong)為什么(me)會出(chu)現條(tiao)狀(zhuang)模糊？

可能存在的原因有：

a. 主(zhu)抗(kang)體(ti)的(de)非(fei)特(te)異(yi)性結合。您應該(gai)將(jiang)單(dan)克隆抗(kang)體(ti)或抗(kang)原親和純化的(de)抗(kang)體(ti)以(yi)更(geng)低的(de)濃度稀釋在5%牛奶(nai)中(zhong)，或者調整非(fei)脫脂奶(nai)粉（2%-5%）或NaCl（0.15-0.5 M）濃度作為(wei)主(zhu)抗(kang)體(ti)溶液。

b. 二抗的(de)非特異性結合。您應該進行一個只用二抗的(de)對照實驗（不(bu)加主抗體）。如果在膜上出現了(le)條(tiao)帶，則(ze)應該稀釋該抗體或嘗試(shi)其他(ta)二抗。

c. 阻斷(duan)不(bu)足。您(nin)應該使(shi)用含(han)有0.1%—0.5% Tween 20、0.15-0.5 M NaCl和25 mM Tris (pH 7.4）的5%脫脂奶(nai)(nai)粉(fen)溶液進行(xing)阻斷(duan)。可(ke)(ke)以延長阻斷(duan)時間。根據需(xu)要(yao)調(diao)整奶(nai)(nai)粉(fen)濃度。在(zai)4℃下(xia)過夜阻斷(duan)可(ke)(ke)能(neng)會(hui)降低阻斷(duan)效果，因為低溫下(xia)洗滌劑可(ke)(ke)能(neng)不(bu)起作用。

d. 洗滌(di)不足。您應(ying)該(gai)增加洗滌(di)緩沖液中Tween 20的(de)濃度（0.1%—0.5%），或(huo)增加洗滌(di)次數。

e. 脫脂奶粉中可能(neng)含有目標抗原或內源性生物素(su)(su)(su)，并且與親和素(su)(su)(su)/鏈霉親和素(su)(su)(su)不相容(rong)。您應該使用3% BSA進行替代。

f. 某(mou)些(xie)IgY抗體可能會識別(bie)奶蛋白(bai)。您應該使用3% BSA進行(xing)替代。

g. 膠片曝(pu)光(guang)過度(du)。您應該(gai)減少曝(pu)光(guang)時間。如果目(mu)標信號過強，請多等待5—10分鐘后重新曝(pu)光(guang)膠片。

Q: 在免(mian)疫印(yin)跡（Western Blot）中，為什么條(tiao)帶看(kan)起來(lai)模(mo)糊且不規則？

可能存在的原因有：

a. 凝膠不好。在填充之前應全部攪拌(ban)溶液(ye)。

b. 某些樣品(pin)的鹽濃度較(jiao)高。您應該對樣品(pin)進行脫鹽或調整鹽濃度。

c. 每個孔中的樣(yang)品(pin)體積不一致。您應(ying)該調整樣(yang)品(pin)體積，使其基本相同。

d. 緩沖(chong)液(ye)不起作(zuo)用。您應該購(gou)買新的緩沖(chong)液(ye)或制備新的緩沖(chong)液(ye)。

e. 膜中(zhong)有氣泡(pao)困住。在轉膜過程中(zhong)要小心地去除任何(he)氣泡(pao)。

f. 電泳(yong)過程(cheng)中溫度(du)過高。您應該減小電流或電壓(ya)。

點擊下方鏈接可查(cha)看不同原因對(dui)應的解決方案

Q: 在免疫印(yin)跡（Western Blot）中，為什么轉膜效率低？

可能存在的原因有：

a. pH值接近等(deng)電點。您應該增加轉膜緩沖液(ye)的pH值。

b. 膜中(zhong)有氣泡困住。在轉膜過程(cheng)中(zhong)要小心(xin)地去除任何氣泡。

c. 濾(lv)紙(zhi)接觸。濾(lv)紙(zhi)、轉(zhuan)膜(mo)和凝膠的大小應基(ji)本相同，以(yi)避免(mian)濾(lv)紙(zhi)直接接觸。

d. 轉膜選擇(ze)不當。您應該使用可靠的PVDF膜或(huo)硝酸纖維膜。

e. 電(dian)壓(ya)或電(dian)流(liu)過低。我們建(jian)議在濕(shi)轉膜(mo)過程(cheng)中使(shi)用(yong)20 mA的恒定(ding)電(dian)流(liu)，半干轉膜(mo)時使(shi)用(yong)25 V的恒定(ding)電(dian)壓(ya)。

f. 轉(zhuan)膜(mo)(mo)時(shi)(shi)間過(guo)長或過(guo)短。根據(ju)蛋白質(zhi)的(de)大小和使(shi)用的(de)電泳設備(bei)，選擇(ze)適(shi)當的(de)轉(zhuan)膜(mo)(mo)時(shi)(shi)間。

g. 濕轉膜(mo)過程(cheng)中環(huan)境(jing)溫度過高。您應該(gai)使用預冷(leng)的轉膜(mo)緩沖液或將裝(zhuang)置設(she)置為4℃。

點擊下(xia)方(fang)鏈接可查看不(bu)同原因對(dui)應的解決(jue)方(fang)案

Q: 在免(mian)疫組(zu)織化(hua)學(xue)染(ran)色中，為(wei)什(shen)么染(ran)色缺失？

可能存在的原因有：

a. 缺乏抗(kang)原。我(wo)們建議通(tong)過原位(wei)雜交檢測蛋(dan)白質(zhi)的表達(da)，因為在某些罕見情況下，即使已檢測到mRNA，蛋(dan)白質(zhi)的翻譯可能(neng)被阻斷。

b. 抗(kang)原在(zai)與一抗(kang)孵育(yu)之前被(bei)破壞。如果在(zai)添加(jia)一抗(kang)之前進行了(le)內源性過氧(yang)化物(wu)酶(mei)的消除，您應(ying)該在(zai)與一抗(kang)孵育(yu)后對過氧(yang)化物(wu)酶(mei)進行阻斷。

c. 抗原(yuan)恢(hui)復效果不好。您應該增加處理時間或更(geng)換處理溶液。

d. 抗體因存儲(chu)不當而失(shi)效。您(nin)應該按照手冊上的存儲(chu)說明操作。通常(chang)將抗體分裝成足夠制(zhi)備單(dan)次實驗的小體積，避免反(fan)復凍融(rong)。

e. 一抗或二抗失活(huo)。您應該獨(du)立測(ce)試報(bao)告系統以評估試劑的有效性。

f. 一抗(kang)和二(er)抗(kang)不(bu)兼容。您(nin)應該(gai)使用能與一抗(kang)相互作用的二(er)抗(kang)。例如(ru)，如(ru)果一抗(kang)是兔(tu)源(yuan)的，則使用抗(kang)兔(tu)二(er)抗(kang)。

g. 組(zu)織固(gu)定(ding)不(bu)充分。您(nin)可以嘗(chang)試增加固(gu)定(ding)時(shi)間或(huo)嘗(chang)試不(bu)同的固(gu)定(ding)劑。

h. 組織(zhi)過度固定(ding)。您(nin)應該減少浸泡或(huo)后固定(ding)步驟的時間。如果(guo)無法避免浸泡固定(ding)，可(ke)以通過使用抗原(yuan)恢復試劑來使抗原(yuan)重(zhong)新顯露。

i. 抗(kang)(kang)原在固定或包埋(mai)過程中發生(sheng)變化。您可以嘗(chang)試通過各(ge)種(zhong)抗(kang)(kang)原恢復技術(shu)來恢復免疫(yi)反(fan)應(ying)性。

j. 遺漏(lou)或錯(cuo)誤使(shi)用(yong)試(shi)劑。您應該重復染色，并(bing)確(que)認正確(que)使(shi)用(yong)了正確(que)順序的試(shi)劑。

Q: 在免疫組織化(hua)學染色中，為什么染色結果不(bu)合適(shi)？

可能存在的原因有：

a. 固定(ding)方法對(dui)抗原不適用(yong)。您(nin)可(ke)以(yi)嘗試不同(tong)的固定(ding)劑或增加固定(ding)時間。

b. 抗原恢(hui)復方法對該(gai)抗原或組(zu)織(zhi)不(bu)適用(yong)。您可以嘗試不(bu)同的抗原恢(hui)復條件(jian)。

c. 抗(kang)原(yuan)的靜電荷發生了變化。您可以嘗試調整抗(kang)體稀(xi)釋(shi)液(ye)的pH值或(huo)陽離子(zi)濃度。

d. 固(gu)定(ding)(ding)延遲導致抗(kang)原擴散(san)。您應(ying)該及時(shi)固(gu)定(ding)(ding)組(zu)織，并(bing)嘗試使用交(jiao)聯(lian)固(gu)定(ding)(ding)劑而不是(shi)有機（醇(chun)）固(gu)定(ding)(ding)劑。

Q: 在(zai)免疫組織化學(xue)染(ran)色中，為什(shen)么背景較高(gao)？

可能存在的原因有：

a. 一(yi)抗和/或二抗濃度(du)過高(gao)。您應(ying)該進行滴(di)定實驗，確定促進一(yi)抗和二抗特異反應(ying)所需的最佳濃度(du)。

b. 一抗(kang)或二抗(kang)與(yu)組(zu)織的非(fei)特異(yi)性結合。您應該在(zai)一抗(kang)孵育之前(qian)進行阻斷步驟。非(fei)脂乳粉是(shi)另(ling)一個選擇。

c. 二抗的(de)非特(te)異性(xing)結合。您應該使用去(qu)除了交叉反應IgG物(wu)種的(de)抗體（對樣本物(wu)種進行(xing)吸附）。

d. 抗體與組織中的(de)蛋白質之間的(de)疏水相互作(zuo)用。您應該降低抗體稀釋液的(de)離(li)子(zi)強度。

e. 背(bei)景(jing)由離(li)(li)子(zi)相(xiang)互作用引起。您應該增(zeng)加稀釋(shi)緩沖液的離(li)(li)子(zi)強度。

f. 組(zu)織(zhi)變干。在染色(se)過程中(zhong)避免組(zu)織(zhi)變干。

g. 試劑(ji)附著在老舊或(huo)準備不良的玻片上。您應該重新準備新鮮的或(huo)購買的玻片。

Q: 在免疫(yi)組織(zhi)化(hua)學染色中，為(wei)什么組織(zhi)或(huo)細胞(bao)形態會被破壞？

可能存在的原因有：

a. 抗原(yuan)(yuan)恢(hui)復方法過于(yu)嚴(yan)酷。您應該根(gen)據(ju)經(jing)驗(yan)確定能(neng)夠保持(chi)組織(zhi)形態的(de)條件，同時(shi)恢(hui)復抗原(yuan)(yuan)的(de)免疫活性。

b. 組織切片(pian)脫落(luo)玻片(pian)。您(nin)應該(gai)增加固定(ding)時間。根據經驗確(que)定(ding)額外(wai)或(huo)替(ti)代(dai)性(xing)的固定(ding)劑(ji)。使用新鮮制備的、電荷充足的玻片(pian)。

c. 染色過程(cheng)中未全部固(gu)定(ding)(ding)導致物理(li)損傷組(zu)織(zhi)或(huo)細胞(bao)。您應該增加(jia)固(gu)定(ding)(ding)時間和(he)/或(huo)增加(jia)后固(gu)定(ding)(ding)步驟。增加(jia)固(gu)定(ding)(ding)劑/組(zu)織(zhi)比例(li)。切割更(geng)小的(de)組(zu)織(zhi)塊以進行更(geng)全部地浸潤固(gu)定(ding)(ding)。

d. 組(zu)織自溶導(dao)致壞死碎(sui)片染色。您應(ying)該增加固定(ding)時間和比(bi)例。考慮使用(yong)交聯固定(ding)劑(ji)。

e. 組(zu)織切(qie)片(pian)出現(xian)撕裂或(huo)折(zhe)疊。您應該在(zai)切(qie)片(pian)下除去(qu)氣(qi)泡(pao)。使(shi)用(yong)鋒利的刀片(pian)重新切(qie)割切(qie)片(pian)，或(huo)在(zai)分析結果時忽略損壞區域。

f. 組(zu)織形態(tai)(tai)分辨率(lv)差。對于冰凍切片，應該切割更薄的組(zu)織切片，因(yin)為冰晶可(ke)能破壞了組(zu)織形態(tai)(tai)。

Q: 在免疫沉(chen)淀（IP）中，為什么會有太多的(de)抗體(ti)洗脫？

您應該在進行免疫沉淀前將抗體(ti)與珠(zhu)子混合，并使(shi)用(yong)溫和的甘氨酸緩沖液梯度洗脫，這(zhe)樣可(ke)以顯著(zhu)減少抗體(ti)的數(shu)量。

Q: 為(wei)什么免疫沉(chen)淀（IP）中的背景太(tai)高？

可能存在的原因有：

a. 抗體與(yu)非特異性(xing)結合(he)過多(duo)。您應該使用(yong)純(chun)化的(de)抗體，并減少(shao)使用(yong)的(de)量。

b. 細胞過多/蛋白質(zhi)過多導(dao)致(zhi)洗脫物中存在大量(liang)非特異性蛋白質(zhi)。減少使用(yong)的細胞數量(liang)/裂解液（10-500 µg）。

c. 不能溶(rong)解的蛋白質(zhi)殘留(liu)。在離心后(hou)立即去(qu)除(chu)上清液(ye)。這(zhe)樣應該將不溶(rong)性蛋白質(zhi)留(liu)在沉(chen)淀(dian)中。如(ru)果重新懸浮發(fa)生，再次離心。

d. 準備的(de)(de)珠(zhu)子過少。您應(ying)該確(que)保BSA新鮮，并使用足(zu)夠的(de)(de)珠(zhu)子在PBS中含有1%的(de)(de)BSA中孵育(yu)1小(xiao)時。在使用之前用PBS洗滌(di)3—4次。

e. 洗(xi)滌不干凈。您應該在(zai)相關階段(duan)進行(xing)充分(fen)的洗(xi)滌，將蓋(gai)子蓋(gai)在(zai)離(li)心(xin)管上，并在(zai)離(li)心(xin)之(zhi)前多次倒置。

f. 在(zai)免(mian)疫沉淀過(guo)程(cheng)中，抗(kang)原(yuan)降解(jie)。您應該(gai)在(zai)裂解(jie)之前添加新鮮的(de)蛋白酶抑制劑(ji)。

Q: 在染(ran)色質免(mian)疫沉(chen)淀（ChIP）中，為什么大區域顯示低分辨(bian)率且背景噪音高？

您應該優(you)化DNA片(pian)段（不超過(guo)1.5 kb）。

Q: 為什么在染色(se)質免疫沉淀(dian)（ChIP）中(zhong)樣本中(zhong)無法擴增DNA？

您應該選擇陽性對照模板(ban)DNA來確認引物的工作情況。

Q: 在流式(shi)細胞術（FC）中為什(shen)么會有高背景？

可能存在的原因有：

a. 增益(yi)設置過高。您應該降低增益(yi)以(yi)減少(shao)信號(hao)，并(bing)使用陽性對照來正確設置流式細胞儀。

b. 抗(kang)體過多。您應該減少抗(kang)體濃度。

Q: 為什(shen)么在流式(shi)細(xi)胞術（FC）中觀察到兩個或更多的細(xi)胞群(qun)體？

可能存在的原因有：

a. 存在多個(ge)細胞(bao)群體表(biao)達目標蛋(dan)白。您(nin)應該檢(jian)查細胞(bao)分離是否(fou)充分。

b. 存在細胞(bao)二聚體(ti)。細胞(bao)二聚體(ti)將顯示為圖(tu)上(shang)大約兩倍熒光(guang)強度的第二個細胞(bao)群體(ti)。您應該(gai)在染色之前(qian)(qian)和在流式(shi)細胞(bao)儀上(shang)運行之前(qian)(qian)使(shi)用(yong)移液管輕(qing)輕(qing)混合細胞(bao)。

Q: 我應該如(ru)何儲(chu)存和分裝(zhuang)抗(kang)體(ti)？

抗體(ti)在(zai)室溫下只穩定幾(ji)天。請(qing)在(zai)收到后將抗體(ti)分(fen)裝并儲存在(zai)-20℃。請(qing)避免(mian)反復凍結和(he)解凍，您可(ke)以根(gen)據(ju)實驗中(zhong)使(shi)用(yong)的(de)(de)量(liang)來分(fen)裝抗體(ti)，但(dan)每(mei)個分(fen)裝物(wu)的(de)(de)量(liang)不應(ying)少于10 μL。每(mei)個分(fen)裝物(wu)的(de)(de)量(liang)越小，液(ye)體(ti)蒸(zheng)發和(he)容(rong)器吸附對抗體(ti)濃度的(de)(de)影響就越大。

北京和一生物科技有限公司專(zhuan)業代理antibodiesinc全系(xi)列產品，專營進口(kou)生物試劑，科學(xue)儀器，實驗消耗品，化工原料及藥物中間體等(deng)。公司(si)與諸多國外(wai)品牌簽下代理，sigma、santa、RD、Abcam、CST、toxin、streck、Biolegend、ebioscience、saracare、polyplus、Beyotime、Novus、moltox等，能為廣大科研用戶提供數萬種試劑、儀器(qi)和實驗(yan)消耗品。

我們公司的優勢:

1：與500多家公司(si)合作，基(ji)本什么品牌(pai)都能進口(kou)，包括血清，抗(kang)體，耗(hao)材，還(huan)有部分限制進口(kou)的

2：部(bu)分(fen)產品現貨，物(wu)流穩定(ding)

3：一(yi)手貨(huo)源，價格(ge)價格(ge)優，售后齊(qi)全，歡迎新老客戶咨詢訂購