CST測試ELISA試劑盒的可靠性

發布時間： 2023-03-22　　點擊次數： 374次

即用(yong)型 ELISA 試劑(ji)(ji)盒無需科研(yan)工作者花費時間(jian)摸索優化條件，因此可(ke)(ke)以簡(jian)化研(yan)發的(de)(de)(de)工作流程(cheng)。其(qi)中至(zhi)關重要的(de)(de)(de)是(shi)，科研(yan)工作者選(xuan)擇的(de)(de)(de) ELISA 試劑(ji)(ji)盒需要具(ju)有批次間(jian)高(gao)度可(ke)(ke)重復性(xing)，才(cai)能得到如預期的(de)(de)(de)項目(mu)進展。如果您的(de)(de)(de)實驗持續很長，但所(suo)使用(yong)的(de)(de)(de) ELISA 試劑(ji)(ji)盒批號(hao)中途(tu)變更了，那您需要確保新、老(lao)批次的(de)(de)(de)表(biao)現是(shi)一致(zhi)的(de)(de)(de)、產(chan)生(sheng)相似的(de)(de)(de)信號(hao)/空白(bai)比，且(qie)任何批次間(jian)差異(yi)需在可(ke)(ke)接受的(de)(de)(de)變異(yi)系數 (%CV) 值范(fan)圍(wei)內。

抗(kang)體作為 ELISA 試(shi)劑盒的核心(xin)組分，與可(ke)重復(fu)性(xing)危機密切相關(guan)，即人們日益認識到的許多科學實(shi)驗(yan)無(wu)法(fa)重復(fu)。確保(bao)實(shi)驗(yan)可(ke)重復(fu)，需要(yao)研究人員謹慎選擇產品(pin)，并(bing)且要(yao)求(qiu)抗(kang)體制造商確保(bao)高質量(liang)、經過很嚴格(ge)驗(yan)證(zheng)的產品(pin)供科研工(gong)作者使用(yong)。至關(guan)重要(yao)的是，抗(kang)體應(ying)對(dui)其(qi)靶標表現(xian)出高度特異性(xing)，并(bing)應(ying)在其(qi)所適用(yong)的應(ying)用(yong)中都經過嚴格(ge)驗(yan)證(zheng)。

在 CST，開發和上市銷售抗體時，我們堅持遵守 Hallmarks of Antibody Validation^™，以確保您獲得自己可以信任的數據。對于不同的抗體，會選擇這六種補充性驗證策略中合適的方法對抗體進行嚴格驗證，進而確保抗體在任何測定法中的特異性、靈敏度和功能性符合要求。這意味著，當選擇 CST^® 抗體時，該抗體的性能保證在我(wo)們公(gong)司(si)產品保證(zheng)范圍內(nei)。

我們的抗體是即用型 FastScan^™、PathScan^® 和 PathScan^® Rapid Protocol (RP) ELISA 試劑(ji)盒(he)(he)的基礎，所有(you)這(zhe)些(xie)試劑(ji)盒(he)(he)均使用(yong)雙抗夾心法，與直接和(he)(he)間接 ELISA 相比，靶標特異性更加優(you)異。在設(she)計和(he)(he)生(sheng)產 ELISA 試劑(ji)盒(he)(he)時，通過確(que)(que)定最佳抗體(ti)對并預(yu)先(xian)進(jin)行所有(you)試劑(ji)盒(he)(he)的開發和(he)(he)驗(yan)證，來確(que)(que)保您(nin)項目全程數據的質量。

瀏覽 ELISA 試劑盒

作為產(chan)品(pin)科學家，在 CST 工作的(de)(de)6年間(jian)，我的(de)(de)大部分職責是測試(shi)(shi)公司 ELISA 試(shi)(shi)劑盒的(de)(de)批間(jian)差異，以確保(bao)批次(ci)間(jian)的(de)(de)一(yi)(yi)致性(xing)。科學可(ke)重復性(xing)是 CST 的(de)(de)核心價值觀(guan)，這(zhe)在我們嚴格驗(yan)證標準中已體(ti)現(xian)。最(zui)終，我們希望無論客(ke)戶收到哪一(yi)(yi)批次(ci)的(de)(de)試(shi)(shi)劑盒，他們的(de)(de)研究(jiu)(jiu)可(ke)以不中斷，且結果(guo)可(ke)信任(ren)。通過(guo)按照公司既(ji)定的(de)(de)標準操作規程 (SOP) 生(sheng)產(chan)每(mei)個批次(ci)的(de)(de)ELISA 試(shi)(shi)劑盒，可(ke)確保(bao)研究(jiu)(jiu)人員獲得的(de)(de)結果(guo)具(ju)有一(yi)(yi)致性(xing)、可(ke)靠性(xing)。

ELISA 試劑盒批次測試要求

在向研究人員提供任一新(xin)批(pi)次(ci) ELISA 試劑盒(he)之前，我(wo)們都進行一系列全(quan)面測試。這些測試起到確認(ren)新(xin)批(pi)次(ci)對目的靶標具(ju)有(you)高(gao)度(du)特異性（低背(bei)景(jing)信號(hao)）、與當前批(pi)次(ci)相當的靈敏(min)度(du)和具(ju)有(you)產(chan)生寬(kuan)動態范圍靈敏(min)度(du)曲(qu)線的能力。

我們會進行如下測試：

有陽性對照和陰性對照的測試

根據 ELISA，用于(yu)(yu)驗證目的(de)的(de)對(dui)照可以是生(sheng)物學(xue)相(xiang)關的(de)樣(yang)(yang)品或靶標蛋白(bai)(bai)內源水平已知（高(gao)表達和(he)低表達）的(de)樣(yang)(yang)品。通過(guo)同時用老(lao)批(pi)次(ci)和(he)新批(pi)次(ci)的(de) ELISA 試劑盒生(sheng)成不同蛋白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)濃度下(xia)吸光度信號變(bian)化的(de)平行滴定曲線，我(wo)們(men)可以確認各數(shu)據集(ji)間(jian)的(de)關聯。由于(yu)(yu)每個模型系統都不同，我(wo)們(men)建議客戶(hu)參考我(wo)們(men)的(de)滴定曲線來確定自己的(de)樣(yang)(yang)品上樣(yang)(yang)蛋白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)濃度。

由于我(wo)們(men)(men)的 FastScan、PathScan 和(he) PathScan RP ELISA 試劑盒(he)是(shi)對相對（而非絕對）定(ding)量(liang)進行驗證，因(yin)此它(ta)們(men)(men)不包含標準(zhun)品(pin)。相反(fan)，我(wo)們(men)(men)建議樣品(pin)可依據(ju)蛋白質(zhi)含量(liang)或細胞數(shu)進行標準(zhun)化。不過，FastScan 試劑盒(he)會(hui)提供凍(dong)干(gan)的陽性對照，以驗證分(fen)析性能。

光密度 (OD) 信號閾值

對(dui)于待驗證的(de)(de) ELISA 試劑盒批次，陽(yang)性(xing)對(dui)照樣品必須具有大(da)于 1.5 的(de)(de)絕對(dui)光密度 (OD) 值，而(er)空(kong)白樣品的(de)(de)信號閾(yu)值應(ying)低于 0.3。在測試我們(men)的(de)(de) PTM 特異性(xing) ELISA 試劑盒時，我們(men)還(huan)設置了適(shi)當的(de)(de)誘導閾(yu)值，以確保磷(lin)酸化對(dui)照樣品的(de)(de)信號顯著(zhu)高于陰性(xing)非(fei)磷(lin)酸化對(dui)照樣品的(de)(de)信號。

此外，相對于最高滴定點，新(xin)批(pi)次ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he)的信(xin)號(hao)/空白比必須(xu)大于5.0。該值(zhi)必須(xu)落(luo)入類似于現有批(pi)次的范圍內，以便(bian)新(xin)批(pi)次符合(he)我們的可重(zhong)復性標準。

PathScan^® Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) Sandwich ELISA Kit #12001 的信號/空白比數據摘要
濃度 (mg/ml)	#12001 第 34 批	#12001 第 35 批
0.075	18.3	16.9
0.0375	11.9	11.9
0.01875	7.8	7.7
0.009375	4.8	4.8

變異系數百分比 (%CV) 值

驗證新 ELISA 試(shi)劑盒批次的另一個關鍵參數是 %CV。為了(le)生(sheng)成(cheng)該值(zhi)，我們對新批次中(zhong)隨機選擇的三個板條運(yun)行滴定曲線，以確定每個重復的平(ping)均值(zhi) (μ) 和(he)標(biao)準(zhun)差 (SD，σ)，然后應用以下公(gong)式：

%CV = (σ / µ) x 100

對于待放行的(de)新(xin)批次，現有批次與(yu)新(xin)批次之間的(de)分析(xi)間差異必須小(xiao)于 15%。

PathScan^® Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) Sandwich ELISA Kit #12001 的變異系數百分比 (%CV) 數據摘要
濃度 (mg/ml)	#12001 第 34 批	#12001 第 35 批	標準差	%CV
0.075	2.734	3.115	0.040	1.28
0.0375	1.781	2.201	0.030	1.34
0.01875	1.166	1.425	0.028	1.93
0.009375	0.710	0.894	0.015	1.66

為(wei)了(le)確保(bao)我們的(de) ELISA 試劑(ji)盒隨時(shi)間推移性能保(bao)持(chi)一致，同時(shi)沒有信號的(de)衰減，我們通常在保(bao)質期過半時(shi)進行質量控制 (QC) 跟(gen)進測試。

為您的下一次 ELISA 實驗提供高質量結果

即用型 ELISA 試劑盒可(ke)以為(wei)您(nin)的(de)研(yan)究帶來許多益處，前提是要(yao)從可(ke)靠的(de)制造商(shang)購買這些產(chan)品。您(nin)的(de)測(ce)定結果的(de)與(yu)使(shi)用的(de)抗(kang)體(ti)高(gao)度相(xiang)關。在(zai) CST，我們(men)使(shi)用經嚴格驗證的(de)高(gao)質量抗(kang)體(ti)作(zuo)為(wei) FastScan、PathScan 和(he) PathScan RP ELISA 試劑盒的(de)基礎，每個(ge)新批次在(zai)可(ke)供給客戶之前都經過全面測(ce)試。通過核(he)實每個(ge)新批次的(de) ELISA 試劑盒與(yu)先前的(de)具有(you)相(xiang)當的(de)性能，我們(men)旨在(zai)確保(bao)您(nin)的(de)項(xiang)目按計(ji)劃進(jin)行，而無任何計(ji)劃外的(de)中斷。

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