什么是內(nei)參？

Western Blot常(chang)用(yong)來比較不(bu)同(tong)條件下或不(bu)同(tong)細胞(bao)組(zu)(zu)織中目標蛋(dan)白(bai)表(biao)達量(liang)(liang)的(de)(de)相對(dui)多少(shao)，因此必須(xu)先(xian)確定(ding)上(shang)樣(yang)量(liang)(liang)相同(tong)，才有(you)比較的(de)(de)基礎。在Western Blot實驗中，可能因總蛋(dan)白(bai)濃度測定(ding)不(bu)準確，或是蛋(dan)白(bai)質上(shang)樣(yang)時因操作產生誤差，所以必須(xu)設(she)置內(nei)(nei)部參(can)照(zhao)組(zu)(zu)來進(jin)行(xing)校正。此內(nei)(nei)部參(can)照(zhao)必須(xu)在不(bu)同(tong)細胞(bao)或組(zu)(zu)織間(jian)表(biao)達相對(dui)恒定(ding)，且有(you)高水平的(de)(de)表(biao)達量(liang)(liang)，來確保不(bu)同(tong)樣(yang)品間(jian)蛋(dan)白(bai)定(ding)量(liang)(liang)相同(tong)。而這樣(yang)的(de)(de)參(can)照(zhao)蛋(dan)白(bai)，就稱為內(nei)(nei)參(can)，對(dui)應的(de)(de)抗(kang)(kang)體就稱為內(nei)(nei)參(can)抗(kang)(kang)體。

內參在WB實驗中的重要性(xing)。

1 用于校正蛋白水平(ping)，確保(bao)不同(tong)樣品間蛋白定量(liang)(liang)(liang)（上樣量(liang)(liang)(liang)）相同(tong)。可從條帶(dai)粗細(xi)初步(bu)(bu)判(pan)定上樣量(liang)(liang)(liang)是否(fou)有差異。進一步(bu)(bu)使用影像分析程(cheng)序將目標(biao)(biao)蛋白量(liang)(liang)(liang)除(chu)以內參含量(liang)(liang)(liang)，所得到的(de)(de)數(shu)值(zhi)即為校正后的(de)(de)目標(biao)(biao)蛋白相對(dui)含量(liang)(liang)(liang)，如此就(jiu)可以進行目標(biao)(biao)蛋白相對(dui)量(liang)(liang)(liang)的(de)(de)比較。

2 確認轉膜、顯色(se)等步(bu)驟(zou)是(shi)(shi)否(fou)均(jun)勻轉移、呈色(se)。內參(can)一(yi)般選用高(gao)表達的蛋白(bai)，因此也可通(tong)過內參(can)的條(tiao)帶，觀(guan)察WB實驗中的轉膜、顯色(se)等步(bu)驟(zou)是(shi)(shi)否(fou)有異常(chang)。

3對(dui)文(wen)(wen)章發表絕對(dui)重要，增加實驗的可信度。文(wen)(wen)章內放(fang)上內參的數(shu)據，較有說服(fu)力，文(wen)(wen)獻審核者也會(hui)較相信實驗數(shu)據。

如何挑內參抗體

通常會(hui)挑(tiao)選各細胞或(huo)組織間穩定(ding)表達、并且(qie)不(bu)受實(shi)驗(yan)影(ying)響的蛋白(bai)作為內(nei)參(can)，但不(bu)同(tong)的實(shi)驗(yan)還是(shi)有(you)一(yi)些細節(jie)要注意(yi)，挑(tiao)選內(nei)參(can)可參(can)考(kao)下面四點：

常(chang)用內參請見下表：